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目的：观察夹脊电针对脊髓损伤大鼠运动功能、脊髓组织神经细胞凋亡及ERK5信号通路相关因子的影响，阐明ERK5信号通路参与夹脊电针治疗脊髓损伤的作用，揭示夹脊电针治疗脊髓损伤的抗凋亡机制。
方法：
实验一：观察夹脊电针对SCI大鼠行为学、组织病理形态及细胞凋亡的影响。将54只大鼠按随机数字表法分成假手术组（Sham）、模型组（Model）和夹脊电针组（EA）3组，每组根据术后1d、3d、7d时间点分为3个亚组，每个亚组6只大鼠，分别给予不同的干预方式。利用BBB评分观察各组大鼠双下肢运动功能；利用HE染色观察脊髓组织病理形态的改变；应用TUNEL检测脊髓组织神经细胞凋亡的情况。
实验二：观察夹脊电针对ERK5信号通路相关因子的影响。实验分组同实验一。利用免疫组化及WesternBlot观察脊髓组织中ERK5、p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2和Bax的表达。
实验三：观察ERK5信号通路在夹脊电针治疗脊髓损伤中的作用。将24只鞘内置管成功的大鼠按随机数字表法分成假手术组（Sham）、模型组（Model）、夹脊电针组（EA）和夹脊电针+抑制剂组（EA+EI）4组，每组6只大鼠，分别给予不同的干预方式。利用BBB评分观察各组大鼠双下肢运动功能；利用HE染色观察脊髓组织病理形态的改变；应用TUNEL检测脊髓组织神经细胞凋亡的情况；利用免疫组化及WesternBlot观察脊髓组织中ERK5、p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2和Bax的表达。
结果：
实验一：
（1）BBB评分观察各组大鼠双下肢运动功能：Sham组大鼠运动功能未见明显异常；Model组大鼠出现双下肢运动功能障碍，与相同时间点Sham组相比较，BBB评分明显下降，差异显著（p＜0.05）；EA组与Model组相比，相同时间点BBB评分均高于Model组，差异具有统计学意义（p＜0.05）。
（2）HE染色观察病理形态学变化：HE染色结果显示，Sham组各个时间点脊髓组织结构完整，白质、灰质、脊髓前角、脊髓后角以及中央管等结构均清晰可见，细胞形态正常，胞体饱满，胞核形态正常，未见出血、神经元水肿等现象。1d时Model组可见灶形斑片状出血，组织间隙增大，正常组织结构被破坏，神经元水肿，胞体皱缩，细胞核固缩，神经细胞数量减少；EA组与Model组相比，细胞形态差异不明显，仍可见片状出血，神经元肿胀。3d时Model组仍可见出血，组织间隙变大，有空泡形成，细胞形态结构发生较为明显的改变，细胞胞体缩小，细胞核固缩成团，神经细胞明显减少，可见大量炎性细胞浸润，胶质细胞数量增多；EA组与Model组相比，组织损伤程度略轻，神经细胞数量略增多，炎性浸润及胶质细胞增多的情况较轻。7d时Model组细胞间隙进一步变大，视野中可见大量空泡，仍可见大量炎性细胞浸润，胶质细胞数量增多；EA组与Model组相比，细胞间隙明显减小，细胞形态结构优于Model组，且神经细胞数量增多，炎性浸润及胶质细胞增多的情况明显减轻。
（3）TUNEL检测观察脊髓组织神经细胞凋亡：Sham组未见明显神经细胞凋亡，与同一时间点Model组和EA组相比均具有显著差异（p＜0.05）。1d时Model组可见神经细胞数量明显减少，凋亡增多，弥散性分布；EA组与Model组无显著差异（p＞0.05）。3d时Model组几乎不可见正常神经细胞，凋亡细胞数量明显增多，多集中分布于损伤区域周围；EA组与Model组相比，凋亡细胞数量明显减少（p＜0.05）。7d时Model组发生凋亡的神经细胞数量与3d时相比，数量减少，散在分布；EA组与Model组相比，神经细胞凋亡明显减少，形态正常的神经细胞明显增多（p＜0.05）。
实验二：
（1）免疫组化检测结果：与Sham组相比，同时间点Model组ERK5、p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2表达显著增高（p＜0.05），并随着损伤时间延长呈表达增加趋势；与Model组相比，同时间点EA组ERK5、p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2表达显著增高（p＜0.05），并随着损伤时间延长呈表达增加趋势；与Sham组相比，同时间点Model组Bax表达水平明显增高（p＜0.05），且3d表达水平最高；与Model组相比，同时间点EA组Bax表达水平明显低于Model组，具有统计学差异（p＜0.05）。
（2）WesternBlot检测结果：与Sham组相比，同时间点Model组ERK5、p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2蛋白表达显著增高（p＜0.05），并随着损伤时间延长呈表达增加趋势；与Model相比，同时间点EA组ERK5、p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2表达显著增高（p＜0.05），并随着损伤时间延长呈表达增加趋势；与Sham组相比，同时间点Model组Bax蛋白表达显著增高（p＜0.05），随受损时间延长Bax表达水平逐渐升高，在术后3d达最值，然后表达水平逐渐下降；与Model组相比，同时间点EA组Bax表达水平呈下降趋势，具有统计学意义（p＜0.05）。
实验三：
（1）BBB评分结果：与Sham组相比，Model组、EA组、EA+EI组BBB评分均有显著统计学差异（p＜0.05）。EA组大鼠BBB评分显著高于Model组（p＜0.05），且EA组大鼠BBB评分显著高于EA+EI组（p＜0.05）。
（2）HE染色结果：Sham组脊髓组织结构正常，灰质、白质、脊髓前角、后角以及中央管结构均清晰可见，细胞形态正常，胞体饱满，胞核形态正常；Model组视野中可见细胞间隙显著增大，大量空泡样改变，神经细胞明显减少，可见大量炎性细胞及胶质细胞增多；EA组与Model组相比较，细胞间隙明显减小，细胞形态结构优于Model组，且神经细胞增多，炎性浸润及胶质细胞增多的情况明显减轻；EA+EI组与EA组比较，损伤情况较为严重，可见神经细胞数量减少。
（3）TUNEL检测结果：Sham组未见明显神经细胞凋亡；与Sham组相比较，Model组神经细胞发生明显凋亡；与Model组相比较，EA组神经细胞凋亡数量明显少于Model组（p＜0.05）；与EA组相比较，EA+EI组凋亡细胞数量明显多于EA组（p＜0.05）。
（4）免疫组化检测结果：与Sham组相比，Model组ERK5、p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2表达水平明显增高（p＜0.05）；与Model组相比，EA组ERK5、p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2表达水平明显增高（p＜0.05）；与EA组相比，EA+EI组p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2表达水平明显降低（p＜0.05），ERK5表达水平无统计学差异（p＞0.05）；与Sham组相比，Model组Bax表达水平显著增加（p＜0.05）；与Model组相比，EA组Bax表达水平显著降低（p＜0.05）；与EA组相比，EA+EI组Bax表达水平亦无明显变化（p＞0.05）。
（5）WesternBlot检测结果：与Sham组相比，Model组ERK5、p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2蛋白的表达水平明显增高（p＜0.05）；与Model组相比，EA组ERK5、p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2蛋白的表达水平明显增高（p＜0.05）；与EA组相比，EA+EI组p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2表达水平明显降低（p＜0.05），ERK5表达水平无统计性差异（p＞0.05）；与Sham组相比，Model组Bax表达水平显著增加（p＜0.05）；与Model组相比，EA组Bax表达水平呈下降趋势，具有统计学差异（p＜0.05）；与EA组相比，EA+EI组Bax表达水平亦无明显变化（p＞0.05）
结论：
1.夹脊电针能够改善脊髓损伤大鼠双下肢运动功能；
2.夹脊电针能够减少脊髓损伤组织神经细胞凋亡，促进脊髓功能恢复；
3.脊髓损伤后，ERK5信号通路被激活，其下游因子CREB、Bcl-2的表达及活化增加；
4.夹脊电针调控ERK5信号通路相关因子，进而抑制脊髓损伤大鼠神经细胞凋亡，是夹脊电针促进脊髓损伤修复作用机制之一。
方法：
实验一：观察夹脊电针对SCI大鼠行为学、组织病理形态及细胞凋亡的影响。将54只大鼠按随机数字表法分成假手术组（Sham）、模型组（Model）和夹脊电针组（EA）3组，每组根据术后1d、3d、7d时间点分为3个亚组，每个亚组6只大鼠，分别给予不同的干预方式。利用BBB评分观察各组大鼠双下肢运动功能；利用HE染色观察脊髓组织病理形态的改变；应用TUNEL检测脊髓组织神经细胞凋亡的情况。
实验二：观察夹脊电针对ERK5信号通路相关因子的影响。实验分组同实验一。利用免疫组化及WesternBlot观察脊髓组织中ERK5、p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2和Bax的表达。
实验三：观察ERK5信号通路在夹脊电针治疗脊髓损伤中的作用。将24只鞘内置管成功的大鼠按随机数字表法分成假手术组（Sham）、模型组（Model）、夹脊电针组（EA）和夹脊电针+抑制剂组（EA+EI）4组，每组6只大鼠，分别给予不同的干预方式。利用BBB评分观察各组大鼠双下肢运动功能；利用HE染色观察脊髓组织病理形态的改变；应用TUNEL检测脊髓组织神经细胞凋亡的情况；利用免疫组化及WesternBlot观察脊髓组织中ERK5、p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2和Bax的表达。
结果：
实验一：
（1）BBB评分观察各组大鼠双下肢运动功能：Sham组大鼠运动功能未见明显异常；Model组大鼠出现双下肢运动功能障碍，与相同时间点Sham组相比较，BBB评分明显下降，差异显著（p＜0.05）；EA组与Model组相比，相同时间点BBB评分均高于Model组，差异具有统计学意义（p＜0.05）。
（2）HE染色观察病理形态学变化：HE染色结果显示，Sham组各个时间点脊髓组织结构完整，白质、灰质、脊髓前角、脊髓后角以及中央管等结构均清晰可见，细胞形态正常，胞体饱满，胞核形态正常，未见出血、神经元水肿等现象。1d时Model组可见灶形斑片状出血，组织间隙增大，正常组织结构被破坏，神经元水肿，胞体皱缩，细胞核固缩，神经细胞数量减少；EA组与Model组相比，细胞形态差异不明显，仍可见片状出血，神经元肿胀。3d时Model组仍可见出血，组织间隙变大，有空泡形成，细胞形态结构发生较为明显的改变，细胞胞体缩小，细胞核固缩成团，神经细胞明显减少，可见大量炎性细胞浸润，胶质细胞数量增多；EA组与Model组相比，组织损伤程度略轻，神经细胞数量略增多，炎性浸润及胶质细胞增多的情况较轻。7d时Model组细胞间隙进一步变大，视野中可见大量空泡，仍可见大量炎性细胞浸润，胶质细胞数量增多；EA组与Model组相比，细胞间隙明显减小，细胞形态结构优于Model组，且神经细胞数量增多，炎性浸润及胶质细胞增多的情况明显减轻。
（3）TUNEL检测观察脊髓组织神经细胞凋亡：Sham组未见明显神经细胞凋亡，与同一时间点Model组和EA组相比均具有显著差异（p＜0.05）。1d时Model组可见神经细胞数量明显减少，凋亡增多，弥散性分布；EA组与Model组无显著差异（p＞0.05）。3d时Model组几乎不可见正常神经细胞，凋亡细胞数量明显增多，多集中分布于损伤区域周围；EA组与Model组相比，凋亡细胞数量明显减少（p＜0.05）。7d时Model组发生凋亡的神经细胞数量与3d时相比，数量减少，散在分布；EA组与Model组相比，神经细胞凋亡明显减少，形态正常的神经细胞明显增多（p＜0.05）。
实验二：
（1）免疫组化检测结果：与Sham组相比，同时间点Model组ERK5、p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2表达显著增高（p＜0.05），并随着损伤时间延长呈表达增加趋势；与Model组相比，同时间点EA组ERK5、p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2表达显著增高（p＜0.05），并随着损伤时间延长呈表达增加趋势；与Sham组相比，同时间点Model组Bax表达水平明显增高（p＜0.05），且3d表达水平最高；与Model组相比，同时间点EA组Bax表达水平明显低于Model组，具有统计学差异（p＜0.05）。
（2）WesternBlot检测结果：与Sham组相比，同时间点Model组ERK5、p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2蛋白表达显著增高（p＜0.05），并随着损伤时间延长呈表达增加趋势；与Model相比，同时间点EA组ERK5、p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2表达显著增高（p＜0.05），并随着损伤时间延长呈表达增加趋势；与Sham组相比，同时间点Model组Bax蛋白表达显著增高（p＜0.05），随受损时间延长Bax表达水平逐渐升高，在术后3d达最值，然后表达水平逐渐下降；与Model组相比，同时间点EA组Bax表达水平呈下降趋势，具有统计学意义（p＜0.05）。
实验三：
（1）BBB评分结果：与Sham组相比，Model组、EA组、EA+EI组BBB评分均有显著统计学差异（p＜0.05）。EA组大鼠BBB评分显著高于Model组（p＜0.05），且EA组大鼠BBB评分显著高于EA+EI组（p＜0.05）。
（2）HE染色结果：Sham组脊髓组织结构正常，灰质、白质、脊髓前角、后角以及中央管结构均清晰可见，细胞形态正常，胞体饱满，胞核形态正常；Model组视野中可见细胞间隙显著增大，大量空泡样改变，神经细胞明显减少，可见大量炎性细胞及胶质细胞增多；EA组与Model组相比较，细胞间隙明显减小，细胞形态结构优于Model组，且神经细胞增多，炎性浸润及胶质细胞增多的情况明显减轻；EA+EI组与EA组比较，损伤情况较为严重，可见神经细胞数量减少。
（3）TUNEL检测结果：Sham组未见明显神经细胞凋亡；与Sham组相比较，Model组神经细胞发生明显凋亡；与Model组相比较，EA组神经细胞凋亡数量明显少于Model组（p＜0.05）；与EA组相比较，EA+EI组凋亡细胞数量明显多于EA组（p＜0.05）。
（4）免疫组化检测结果：与Sham组相比，Model组ERK5、p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2表达水平明显增高（p＜0.05）；与Model组相比，EA组ERK5、p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2表达水平明显增高（p＜0.05）；与EA组相比，EA+EI组p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2表达水平明显降低（p＜0.05），ERK5表达水平无统计学差异（p＞0.05）；与Sham组相比，Model组Bax表达水平显著增加（p＜0.05）；与Model组相比，EA组Bax表达水平显著降低（p＜0.05）；与EA组相比，EA+EI组Bax表达水平亦无明显变化（p＞0.05）。
（5）WesternBlot检测结果：与Sham组相比，Model组ERK5、p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2蛋白的表达水平明显增高（p＜0.05）；与Model组相比，EA组ERK5、p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2蛋白的表达水平明显增高（p＜0.05）；与EA组相比，EA+EI组p-ERK5、CREB、p-CREB、Bcl-2表达水平明显降低（p＜0.05），ERK5表达水平无统计性差异（p＞0.05）；与Sham组相比，Model组Bax表达水平显著增加（p＜0.05）；与Model组相比，EA组Bax表达水平呈下降趋势，具有统计学差异（p＜0.05）；与EA组相比，EA+EI组Bax表达水平亦无明显变化（p＞0.05）
结论：
1.夹脊电针能够改善脊髓损伤大鼠双下肢运动功能；
2.夹脊电针能够减少脊髓损伤组织神经细胞凋亡，促进脊髓功能恢复；
3.脊髓损伤后，ERK5信号通路被激活，其下游因子CREB、Bcl-2的表达及活化增加；
4.夹脊电针调控ERK5信号通路相关因子，进而抑制脊髓损伤大鼠神经细胞凋亡，是夹脊电针促进脊髓损伤修复作用机制之一。