朝医万金文武汤改善糖尿病心肌病大鼠心肌损伤的机制研究

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目的:探讨朝医万金文武汤(WJD)对糖尿病心肌病(DCM)大鼠心脏功能障碍及炎症反应的影响,并阐明其药用机制与调节MAPK/NF-κB信号通路之间的关系。方法:将健康雄性SD大鼠(200±20 g)共60只于动物实验室喂养7天,用高脂高糖饲料喂养1个月,随后对大鼠进行腹腔注射给予链脲佐菌素(STZ)35mg/kg用于干预,并且利用大鼠尾静脉采血来检测血糖,在干预后的72小时和第七天分别进行了大鼠血糖检测,两次针对大鼠空腹血糖的测量结果均≥11.1mmol/L,表明前期大鼠造模成功。同时本研究也对正常组大鼠进行了腹腔注射,依据STZ射量的体重来计算,注射等体积的柠檬酸钠缓冲液。造模成功后大鼠随机分为正常组(Control)、糖尿病心肌病模型组(DCM)、二甲双胍组(MET)、万金文武汤低剂量组(WJDL)、万金文武汤高剂量组(WJDH),并继续以高脂高糖饲料喂养。每周定时测体重及血糖的变化,并持续进行8周的灌胃。对Control组和DCM组的大鼠均利用等体积生理盐水进行灌胃处理,以其他组灌胃量的体重作为参考用于计算;MET组的治疗是利用200 mg/kg/d进行灌胃;WJDL组的治疗是利用300 mg/kg/d进行灌胃;WJDH组的治疗是利用600 mg/kg/d进行灌胃。灌胃结束后测量其血糖、体重,计算血糖曲线下面积(AUC),采用PV-loop插管法用于检测左心室血流动力学所发生的变化,同时进行采血,取心脏,并记录所取心脏的重量。生理记录系统监测心率(HR)、心输出量(CO)、左心室压最大上升速率(+dp/dt max)、左心室压最大下降速率(-dp/dt max)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张压(LVDP)及左心室舒张末压(LVEDP)。最后利用ELISA试剂盒测定血清中Ang-Ⅱ、AGE、GSH-Px、SOD、MDA及TG等水平变化;HE染色观察心肌组织病理变化;Western Blot蛋白印迹法,观察心肌细胞ERK1/2、p38 MAPK、JNK、NF-κB p65、HIF-1α等蛋白表达变化。结果:在血糖、心体比水平中,WJD治疗组的大鼠血糖水平与DCM组相比出现了明显的降低(P<0.05);WJDH组的心体比水平与DCM组相比也呈现出下降趋势(P<0.05),而WJDL心体比水平无明显改变。OGTT、AUC结果表明,与DCM组相比,WJDH组的30、60、120 min血糖水平及AUC明显下降(P<0.05)。PV-loop插管法检测结果发现,与DCM组相比,WJDH组的CO、+dp/dt max、LVSP、LVDP值的趋势明显上升;-dp/dt max、LVEDP值的趋势呈现下降(P<0.05)。ELISA法检测,与DCM组比较,WJDH组显著降低了Ang-Ⅱ、AGE、MDA及TG的血清学指标(P<0.05),且增加了GSH-Px、SOD水平(P<0.05)。Western Blot结果显示,WJDH组的p38 MAPK、NF-κB p65、HIF-1α蛋白水平呈下降趋势(P<0.05)。HE染色中WJDH组的心肌细胞排列较规律,间质减少,组织结构和形态也比较完整;WJDL组的心肌细胞排列稍不规整,间质增大,组织结构及形态不够清晰。结论:朝医万金文武汤显著改善大鼠DCM诱发的心功能损伤、炎症反应及抗氧化,其药用机制可能与调控MAPK/NF-κB信号通路有关。
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