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Fascin(聚束蛋白)是一类结构独特且进化保守的肌动蛋白交联蛋白,能够参与肌动蛋白束的形成及肌动蛋白的组装。聚束蛋白与细胞表面各种突起(如细胞伪足)的形成、细胞粘附及细胞的迁移运动等生命活动密切相关,医学研究还表明聚束蛋白与多种癌症的发生有一定的关联。近期完成的水螅基因组计划研究结果显示水螅也具有fascin基因类似基因,而水螅fascin蛋白生理功能目前未知、值得深入探讨。基于此,本研究针对大乳头水螅fascin基因进行了以下实验工作: 1.提取大乳头水螅总RNA,采用SMART技术制备大乳头水螅RACE cDNA文库,再以该文库为模板扩增了大乳头水螅fascin基因cDNA序列,PCR产物纯化后与克隆载体pMD-18T连接,转化E.coli JM109菌株。运用菌落PCR方法鉴定阳性克隆后进行DNA测序,测序结果表明大乳头水螅fascin基因cDNA序列编码区全长序列为1485个核苷酸,编码495个氨基酸。大乳头水螅fascin基因cDNA序列的成功克隆为深入探讨fascin基因的分子进化及水螅fascin蛋白的生理功能奠定了基础。 2.基于原核表达质粒pET-LT多酶切位点的特点设计引物,以已克隆获得的pMD18-T-fascin重组质粒为模板,PCR扩增大乳头水螅fascin基因片段(编码区cDNA序列的第4位点至1071位点),再把该基因片段的PCR产物纯化后连接到原核表达质粒pET-LT上,构建重组表达载体pET-LT-fascin,转化E.coli BL21(DE3)菌株,IPTG诱导表达重组蛋白。SDS-PAGE胶检测结果表明本实验成功表达了重组水螅fascin蛋白,并且该重组蛋白的主要存在形式为包涵体。本实验获得的重组水螅fascin蛋白将有助于后续制备fascin蛋白的抗体及利用分子免疫方法研究fascin蛋白在水螅体内的表达模式和表达动态等科研工作的开展。