滋养层细胞是胎盘屏障的重要组成成分,对胚胎的植入过程起重要的调节作用。本研究旨在进行体外培养、鉴定蒙古绵羊滋养层细胞(trophoblastic cells),并对其生物学特征进行探究,来建立一种能稳定、方便地获得较高纯度的绵羊绒毛膜滋养层细胞的方法,为后续的细胞转染和RNA干扰试验提供细胞学基础。经过培养不同孕期(早、中、晚)的蒙古绵羊滋养层细胞,发现胎盘的采集时间对细胞的贴壁率及细胞活性影响较大,确定采集胎盘的最佳时期为孕中期。通过添加不同浓度的血清,筛选出含15%胎牛血清(Fetal Bovine Serum FBS)的高糖DMEM培养体系较适合细胞生长。细胞培养初期,通过胰酶消化差速法,去除上皮样细胞中混杂的成纤维状细胞,并在5代之内得到纯化的细胞。应用伊红-苏木素染色法(HE),可观察到纯化的细胞形态多样,呈多角形或卵圆形,细胞界限清楚,胞浆透明,核圆或呈小泡状。使用免疫组织化学方法,分别检测不同孕期的正常绵羊胎盘绒毛组织,以及体外培养的滋养层细胞,结果显示,培养的滋养层细胞中细胞角蛋白呈阳性表达,波形蛋白呈阴性表达,证明细胞的纯度在90%以上,符合后续实验的要求纯度。应用透射电子显微镜观察绵羊绒毛膜滋养层细胞,观察结果显示,所培养的细胞具有滋养层细胞的典型结构,细胞表面有丰富的微绒毛,细胞质内线粒体较多,并可见电子密度较高的脂滴,细胞核较大,细胞间可见缝隙连接结构,提示所培养细胞为绵羊绒毛膜滋养层细胞。利用RT-PCR技术检测滋养层蛋白-1,结果显示,纯化的细胞能够表达滋养层蛋白-1。研究结果表明,本试验应用组织块培养法制备原代滋养层细胞,该方法简便易行,可以有效获得较高纯度的,且具有生物学活性的绵羊绒毛膜滋养层细胞,为本实验室后续的体外研究提供细胞学基础。