【摘 要】
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目的通过析因设计对血府逐瘀汤拆方,明确血府逐瘀汤全方中抑制细胞迁移的主要药物并探究其作用机理,为该方在临床上防治恶性肿瘤提供理论指导。方法1对血府逐瘀汤全方进行拆方为A因素（桃仁、红花、赤芍、川芎、当归、生地黄）、B因素（枳壳、柴胡、甘草）和C因素（牛膝、桔梗）,并通过析因设计（三因素两水平）,设立A+B+C、A+B、A+C、A、B、B+C、C和模型八个组别,制备各组药物组合的水提物并添加到培养基
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目的通过析因设计对血府逐瘀汤拆方,明确血府逐瘀汤全方中抑制细胞迁移的主要药物并探究其作用机理,为该方在临床上防治恶性肿瘤提供理论指导。方法1对血府逐瘀汤全方进行拆方为A因素（桃仁、红花、赤芍、川芎、当归、生地黄）、B因素（枳壳、柴胡、甘草）和C因素（牛膝、桔梗）,并通过析因设计（三因素两水平）,设立A+B+C、A+B、A+C、A、B、B+C、C和模型八个组别,制备各组药物组合的水提物并添加到培养基中,对ptc＞scrib-IR果蝇幼虫翅成虫盘细胞迁移模型进行干预,测量并分析各组翅成虫盘中细胞迁移的中位距离,明确抑制细胞迁移的最佳拆方因素。2拆方实验结果显示拆方B+C（枳壳、柴胡、甘草、牛膝、桔梗）为抑制细胞迁移的最佳拆方因素,然后课题组将B+C（枳壳、柴胡、甘草、牛膝、桔梗）组设0.00125g/m L、0.0025g/m L、0.005g/m L、0.010g/m L、0.020g/m L五个浓度对上述细胞迁移模型进行加药处理;其中,对照组和模型组喂食正常培养基,加药组分别喂食含不同浓度B+C的培养基,测量并分析各组翅成虫盘中细胞迁移的中位距离,明确其最佳抑制浓度。3（1）免疫荧光法检测细胞迁移相关蛋白基质金属蛋白酶-1（MMP1）、β-整合素（β-Integrin）以及E-钙黏素（E-cadherin,E-cad）的体内表达;（2）X-Gal染色法检测JNK信号负调控因子puc的体内表达;（3）荧光标记法检测JNK信号通路下游AP-1转录复合物结合位点报告基因TRE-RFP的体内表达。结果1血府逐瘀汤拆方各组,同模型组相比,其他组的细胞迁移中位距离明显降低,差异有统计学意义（P＜0.0001）;同A+B+C（全方）组相比,B+C（枳壳、柴胡、甘草、牛膝、桔梗）组的细胞迁移中位距离明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。2同模型组相比,B+C所有干预浓度组的细胞迁移中位距离均有下降,差异有统计学意义（P＜0.0001）;其中干预浓度为0.010g/m L时,细胞迁移中位距离降低最为显著（P＜0.05）。3同对照组相比,模型组中的MMP-1和β-Integrin表达明显上调,而E-cad表达明显下调;同模型组相比,0.010g/m L B+C可以明显抑制MMP-1、β-Integrin表达的上调和E-cad表达的下调。4同对照组相比,模型组中puc和TRE-RFP的表达明显上调,0.010g/m L B+C干预后puc和TRE-RFP表达的上调被明显抑制。结论1血府逐瘀汤各拆方分组均对细胞迁移中位距离有明显抑制作用,其中B+C（枳壳、柴胡、甘草、牛膝、桔梗）的组合为抑制细胞迁移的最佳因素。2B+C在不同浓度对细胞迁移都有抑制作用,且0.010g/m L剂量为最佳。3 B+C通过抑制MMP1、β-Integrin和促进E-cad的表达介导上皮间质转化,抑制细胞迁移。4B+C可能是通过抑制puc表达和AP-1转录活性干预JNK/AP-1信号通路介导的细胞迁移。图 11 幅;表 5 个;参 156 篇。
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