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1.大肠杆菌F<,41>黏附素基因的原核表达
仔猪腹泻主要是由产肠毒素性大肠杆菌引起的一种传染病。本研究以F<,41>黏附素蛋白为主要研究对象，应用分子生物学手段，表达了F<,41>黏附素蛋白。
(1)F<,41>黏附素基因的序列分析参照文献报道，设计合成了一对特异的带特定酶切位点的引物，以提取的F<,41>基因组DNA为模板，用PCR的方法成功扩增出F<,41>黏附素基因，并进行序列测定。结果表明：所测的F<,41>黏附素基因核苷酸全长834bp，与GenBank数据库公布的参考序列(编号M21788)的核苷酸同源性为100％。
(2)F<,41>黏附素基因的表达纯化的PCR产物经克隆位点双酶切后与经同样位点双酶切的原核融合表达载体pET-28a连接，将连接产物转化至克隆菌株E.coliDH5a，构建重组表达质粒pET-F<,41>；抽提pET-F<,41>质粒，转化至表达菌株E.coliBL21，构建表达重组菌pET-F<,41>-BL21，经鉴定后将其在IPTG诱导下表达。结果表明：成功构建了pET-F<,41>质粒，并获得了pET-F<,41>-BL21表达重组菌；SDS-PAGE分析表明，该重组菌在含100μg/mLKan<+>的LB培养液中，30℃经lmmol/mLIPTG诱导5h，目的蛋白能获得高效表达，目的蛋白大小为31.5kDa。
2.大肠杆菌F<,41>菌毛蛋白的提取及ELISA检测方法的建立
(1)本实验采用热振荡的方法提取产肠毒素性大肠杆菌F<,41>的菌毛蛋白，用紫外分光光度计检测所提取的菌毛的浓度，根据公式计算可得所提取的菌毛蛋白的浓度是1.19mg/mL；SDS-PAGE检测所提取的菌毛蛋白的纯度和分子量，胶图显示为一条清晰的条带，大小为29.5kDa，表明所提取的菌毛蛋白没有杂蛋白。
(2)用棋盘滴定法确定间接ELISA检测卵黄抗体效价的最适反应浓度，确定了抗原最佳包被浓度是149 μg/mL，阴性血清最佳稀释倍数是1：40，酶标二抗的最佳稀释倍数是1：15000。
(3)将F<,41>菌毛蛋白分别与弗氏佐剂和K<,88>-K<,99>-<,987>P三价亚单位疫苗混合，制成弗氏佐剂苗和K<,88>-K<,99-987>P-F<,41>四价亚单位疫苗，对产蛋鸡进行免疫，在二免一周后开始收集卵黄抗体，用间接ELISA对卵黄抗体效价进行检测，结果表明：所提取的F<,41>菌毛蛋白在单独使用和与三价联苗混合使用时，都能诱导高效价的卵黄抗体，且持续时间较长。