曲克芦丁是天然存在的芦丁经羟乙基化制成的半合成的黄酮类化合物,是心脑血管药维脑路通中最重要的成分,又因具有维生素P4样的作用而被称作维生素P4,化学名为3’,4’,7-三羟乙基芦丁。具有抑制红细胞和血小板的凝集作用;预防血栓的形成;同时能够保护血管内皮细胞,降低血管壁的通透性和消除水肿;抗炎;抗化学性肝损伤等药理作用。临床上常用来治疗脑梗塞及中风后遗症、慢性静脉功能不全、静脉曲张、痔疮、长距离飞行微血管等疾病。尽管曲克芦丁已经在临床上使用多年,但是有关其不良反应的报导却逐渐增多,并且目前有关曲克芦丁在体内的代谢报道较少,仅有一些关于曲克芦丁在人和大鼠体内的药代动力学研究,对于曲克芦丁在体内的代谢情况没有完全的认识。为了研究曲克芦丁在大鼠体内和体外的代谢转化情况,本文对曲克芦丁在大鼠体内和体外代谢的情况进行了较为深入的研究。主要研究内容概括如下:1.曲克芦丁的代谢产物研究Sprague-Dawley大鼠腹腔注射曲克芦丁后,收集24h的尿液和粪便样品,样品处理后用HPLC检测,结果表明:给药尿液与空白尿液没有明显差别,但在粪便样品中检测到一明显的代谢产物峰。采用肠道菌群体外培养法培养曲克芦丁,将得到的肠道菌群培养样品样品处理后用HPLC分析,也检测到一明显的代谢产物峰,且其保留时间与粪便中检测到的保留时间一致。然后用肠道菌群体外大量培养曲克芦丁,将得到的肠道菌群培养液进行萃取后分离纯化,得到一纯代谢产物,并将该物质进行核磁共振、质谱分析,确定其结构和分子式,为曲克芦丁脱去芸香糖得到的苷元,即3′,4′,7-三(-o-羟乙基)槲皮素,分子式为c12h22o10。2.生物样品中曲克芦丁和曲克芦丁苷元定量分析方法的建立本文采用液液萃取的方法提取大鼠肠道菌群样品、尿液、粪便和胆汁中的曲克芦丁和曲克芦丁苷元,建立了曲克芦丁和曲克芦丁苷元的hplc分析方法。色谱柱为shim-packodsc18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-1.7%冰醋酸并采取线性梯度洗脱的方式(0~15min,41:59~41:59;15~30min,41:59~65:35;30~40min;65:35~41:59);流速为1.0ml·min-1;检测波长为350nm;柱温为40℃;内标是芦丁。结果表明,内源性杂质对曲克芦丁和曲克芦丁苷元的测定无干扰。采用本文建立的生物样品预处理方法和hplc法分离测定生物样品中的曲克芦丁和曲克芦丁苷元的含量,生物样品的预处理方法具有很高的回收率,也具有良好的分离选择性。本方法中的线性范围、灵敏度、特异性、精密度和准确度均符合体内药物分析的要求,并且该方法法已经成功地运用于肠道菌群、尿液、粪便和胆汁中曲克芦丁和曲克芦丁苷元的含量检测。3.曲克芦丁和曲克芦丁苷元在大鼠体内和体外的代谢与排泄研究采用体外培养大鼠肠道细菌和腹腔注射给药的的方式代谢曲克芦丁,收集肠道菌群孵育液、尿液、粪便和胆汁样品,并采用hplc法对曲克芦丁及其代谢物曲克芦丁苷元的代谢情况进行研究。结果表明:曲克芦丁在大鼠肠道细菌中的代谢速率较快,曲克芦丁在前6h减少了77、13%,前12h减少了99、14%,24h代谢完全。代谢产物-曲克芦丁苷元自孵育1h时即产生,随后逐渐增多,6h时浓度最大,随后缓慢减少。曲克芦丁在1h时尚有较高浓度,随后浓度迅速下降,12 h时浓度基本降至谷底,说明曲克芦丁在肠道菌群的作用下转化迅速,糖苷键迅速被裂解,绝大部分转化为曲克芦丁苷元。SD大鼠腹腔给药曲克芦丁后,尿液中的排泄结果显示,0~24h的排泄量占总给药量的16.17%。粪便中的排泄结果显示,0~24h的排泄量占总给药量的0.54%。0~24h内从胆汁中排泄的曲克芦丁占总给药量的58.94%。0~24h内粪便中曲克芦丁苷元的产生量占总给药量的22.69%。