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目的:二至丸是经典的中药传统口服制剂,由酒女贞子Fructus Ligustri Lucidi和墨旱莲Herba Ecliptae共2味中药组成,具有补益肝肾、滋阴止血的功效,用于治疗围绝经综合征、脂溢性脱发、白癜风、亚急性甲状腺炎、肾病综合症等疾病,是临床常用药。生物药剂学是研究药物及其剂型在体内吸收、分布、代谢、排泄的过程,生物利用度则是其吸收环节的关键研究指标,良好的生物利用度是药物开发使用的重要条件之一,通过相关技术改变剂型提高药物生物利用度是生物药剂学研究的重要内容,两者相互影响,相辅相成。剂型设计的目的之一是改变药物的渗透性,渗透性影响药物的吸收速率,进而影响药物的生物利用度,是决定药物是否具有开发潜力和应用前景的重要因素。在多种渗透性研究模型中,平行人工膜渗透模型（PAMPA）具有高通量、低成本、检测手段方便、灵活性高等优点,对于中药多成分渗透性研究更为适宜,并具有操作简便,重复性高,准确的优势。本课题首先对不同批次二至丸中多种化学成分进行检测,采用化学计量学模型进行质量分析研究。其次建立并优化了体外渗透性模型-PAMPA模型,对二至丸中可渗透性成分进行筛选和评价。最终基于生物药剂学分类模型探讨了二至丸水蜜丸制剂工艺对其口服生物利用度的影响,为中药复方制剂研究提供思路。方法:采用超高效液相（UPLC）对不同批次二至丸配伍粉末样品中的多成分进行含量检测,结合化学计量学中偏最小二乘法-判别分析（PLS-DA）、聚类分析（HCA）等模型对检测结果进行归纳总结,客观选择指标性成分。以蛋黄卵磷脂、十二烷为成膜材料建立PAMAP模型,采用荧光染料检漏对膜完整性进行考察;对助溶剂含量、孵育时间等PAMPA模型中关键影响因素进行优化;利用阳性药对PAMPA模型渗透性进行双侧验证。基于PAMPA模型,对传统口服中药二至丸中成分单体和制剂进行透过研究,筛选可渗透成分,考察制剂辅料、配伍组分对成分渗透性的影响机制,结合生物药剂学分类系统（BCS）探讨二至丸传统水蜜丸制剂工艺对口服生物利用度的影响,进一步发展传统中药制剂研究的体外评价方法。结果:在多批次二至丸质量评价研究中发现,不同产地药材中各成分含量具有一定差异;对比各批次样品中特女贞苷成分含量,结果均高于药典规定的4.0 mg.g-1,但批次间特女贞苷含量波动较大;HCA分析将产地气候和降水量相近的配伍样品识别为一类;PLS-DA模型R2X=0.966、Q2=0.415,置换检验所得R2=0.261、Q2=-0.587,该模型将安徽、河南、湖南、江苏、四川5种产地的女贞子配伍样本显著分离,分析得到变量投影分析（VIP）值大于1的成分有女贞酸、特女贞苷、女贞苷G13、木樨榄苷-11-甲酯、松果菊苷,说明此5种成分对二至丸质量研究影响较大,可作为二至丸指标性成分。建立PAMPA模型并对其完整性进行考察,结果表明4 h荧光素钠表观渗透率均值为0.056×10-6远低于标准线0.6×10-6,说明本实验所建人工膜完整无渗漏;筛选确定助溶剂二甲基亚砜（DMSO）浓度为5%,药物孵育时间为16 h;采用高渗透性药物普萘洛尔和低渗透性药物呋塞米为阳性对照药对PAMPA模型渗透性进行双侧检验,结果表明普萘洛尔有效渗透系数（lg Pe）=-3.58,属于高渗透范围,呋塞米lg Pe=-7.51,属于低渗透范围,双侧阳性药渗透属性划分结果准确。采用建立的PAMPA模型进行二至丸渗透性研究,发现二至丸中酪醇、红景天苷、女贞酸、木樨榄苷-11-甲酯、松果菊苷、异槲皮苷、异绿原酸A、毛蕊花糖苷、特女贞苷、蟛蜞菊内酯、女贞苷G13共11种成分单体里,可透过成分仅有2种,分别为酪醇和特女贞苷;在二至丸水蜜丸制剂中可透过的成分有3种,分别为酪醇、特女贞苷和女贞苷G13。成分酪醇,单体lg Pe=-5.08属于中等渗透性成分,制剂中lg Pe均值=-4.47,属于高渗透性成分;成分特女贞苷,单体lg Pe=-6.80,制剂中lg Pe均值=-6.41,两者属性划分一致均属于低渗透性成分;成分女贞苷G13,单体未见透过,制剂中lg Pe均值=-6.65,属于低渗透性成分。基于PAMPA模型进一步考察了二至丸水蜜丸制剂工艺中辅料、组方配伍等因素对成分渗透性的影响。在辅料影响研究中,考察常用的荆条、洋槐、枸杞、枣花4种蜂蜜,分别炼制为嫩、中、老蜜三等。在组方配伍影响研究中,将墨旱莲提取冻干,以冻干粉末与女贞子药材粉末配伍。2组均以无蜜粉末组制剂为对照,检测3种可渗透成分的渗透系数、溶液p H值和溶液中成分含量的变化。结果表明蜂蜜组、墨旱莲提取组、无蜜粉末组中成分酪醇lg Pe分别为-4.52±0.20（高渗透性）、-2.83（高渗透性）、-4.32（高渗透性）,成分特女贞苷lg Pe分别为-6.90±0.13（低渗透性）、-4.96（高渗透性）、-7.33（低渗透性）,成分女贞苷G13 lg Pe分别为-7.10±0.09（低渗透性）、-6.46（低渗透性）、-7.54（低渗透性）;溶液p H分别为6.05、5.30、6.06;溶液中酪醇含量分别为4.19±0.15μg·m L-1、2.06μg·m L-1、4.27μg·m L-1,特女贞苷含量分别为284.29±4.28μg·m L-1、296.54μg·m L-1、265.00μg·m L-1,女贞苷G13含量分别为74.51±1.56μg·m L-1、82.93μg·m L-1、68.87μg·m L-1。采用高分辨质谱对墨旱莲提取前后化学成分进行定性分析,结果表明墨旱莲提取后较墨旱莲粉末化学成分发生了改变。根据成分平衡溶解度和渗透系数进行BCS分类,在对照品单体、市售制剂、WM-提取液中,成分酪醇的BCS分类分别为Ⅲ、Ⅰ、Ⅰ类,特女贞苷的BCS分类分别为Ⅲ、Ⅲ、Ⅰ类,女贞苷G13的BCS分类均为Ⅲ类。成分在市售制剂中的分类结果优于单体,说明制剂形式可提高成分渗透系数,改变成分BCS分类;成分特女贞苷在墨旱莲提取后由BCSⅢ类成分变为BCSⅠ类成分,说明二至丸水蜜丸制剂工艺中墨旱莲提取是改变成分渗透系数的关键因素。结论:25批二至丸配伍样品质量均符合《中国药典》规定,但各样品间成分含量波动较大,不同产地中药质量具有一定差异;HCA聚类分析表明女贞子药材产地的气候类型和降雨量对配伍聚类结果有较大影响。因此在二至丸质量评价中,中药女贞子的产地、产地气候类型、降雨量具有一定评估价值。PLS-DA模型可对5产地女贞子进行有效识别,VIP值大于1的成分均为中药女贞子中的化学成分,说明二至丸不同批次间质量波动与药材女贞子有关。采用荧光素钠检漏,以普萘洛尔和呋塞米为阳性药对PAMPA模型渗透性进行双侧验证,结果表明本实验所建平行人工膜完整无渗漏且渗透性良好,模型建立成功。基于PAMPA模型筛选所得酪醇、特女贞苷、女贞苷G13成分中仅有2种成分（特女贞苷、女贞苷G13）与化学计量学客观选取的指标成分相吻合,表明生物利用度研究对中药质量评价具有重要作用。二至丸水蜜丸制剂工艺影响研究中发现,不同种类、炼制程度的蜂蜜对成分渗透性、溶液p H值、成分含量均无明显影响;根据高分辨质谱分析结果表明,部分成分（酪醇、特女贞苷、女贞苷G13）渗透性升高以及二至丸中成分单体、制剂中成分渗透情况差异原因可能与溶液p H值降低、墨旱莲提取后化学成分改变相关。以成分酪醇、特女贞苷、女贞苷G13为代表,基于BCS分类系统发现渗透性是影响二至丸口服生物利用度的关键因素,而二至丸水蜜丸制剂工艺中墨旱莲提取可提高部分成分渗透性,进而提高二至丸的口服生物利用度。