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目的:通过体外实验观察蠲痹补肾方含药血清对类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(Fibroblast-likeSynoviocytes,FLS)增殖和凋亡的作用,以及对PCNAmRNA、CDK2mRNA、Bcl-2mRNA、BaxmRNA表达的影响,为临床应用提供实验依据。
方法:1.采用单纯胶原酶法体外培养人成纤维样滑膜细胞;2.制作蠲痹补肾方含药血清,体外作用于成纤维样滑膜细胞,通过流式细胞术检测Ki67蛋白表达、AnnexinV/PI染色法检测细胞凋亡,研究含药血清对成纤维样滑膜细胞增殖和凋亡的作用;3.通过RT-PCR法检测蠲痹补肾方含药血清作用下,成纤维样滑膜细胞PCNAmRNA、CDK2mRNA、Bcl-2mRNA、BaxmRNA的表达情况。
结果:1.蠲痹补肾方含药血清能降低人成纤维样滑膜细胞Ki67蛋白表达阳性率(p<0.001),同时也能减少人成纤维样滑膜细胞PCNAmRNA、CDK2mRNA的表达(p<0.001)。2.蠲痹补肾方含药血清能增加入成纤维样滑膜细胞的凋亡率,与对照组比较差异有统计学意义(p<0.001),同时能抑制人成纤维样滑膜细胞Bcl-2mRNA表达,促进BaxmRNA的表达(p<0.01)。
结论:蠲痹补肾方含药血清能抑制体外培养的人成纤维样滑膜细胞增殖,其机制可能是通过减少PCNAmRNA、CDK2mRNA表达,调控细胞周期实现的;同时蠲痹补肾方含药血清能促进体外培养的人成纤维样滑膜细胞凋亡,下调Bcl-2mRNA表达,上调BaxmRNA是其可能的作用机制。