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阪崎肠杆菌(Cronobacter sakazakii)是以动物和人类作为宿主寄生的革兰氏阴性细菌,可引起严重的新生儿脑膜炎,菌血症和坏死性小肠结肠炎,该菌感染引起的死亡率在50%以上。婴儿配方奶粉被认为是新生儿C.sakazakii感染的主要渠道,因此对奶粉厂C.sakazakii的溯源和有效控制是奶粉厂亟待解决的问题,对保障奶粉的质量安全具有重要的实际意义。为分析奶粉工厂可能的C.sakazakii污染来源,并针对不同环节特点设计有效的处理措施。本课题分析了奶粉生产加工过程可能污染C.sakazakii的环节并采集样品进行C.sakazakii检测、16SrDNA基因序列分析不同来源C.sakazakii的同源性,比较不同来源菌株在不同温度条件下、不同清洗条件下生存能力,利用ERIC-PCR方法建立指纹图谱比较四株C.sakazakii基因组重复序列之间差异性。结果表明,从奶粉工厂各环节进行采样,共23处,利用国标和常规PCR两种方法检测,在其中8处有菌存在,并确定3株为C.sakazakii。利用16SrDNA方法对C.sakazakii E(ATCC29544)、分离自成品一段奶粉中的C.sakazakii A、分离自回收细粉中的C.sakazakii H、分离自地漏中的C.sakazakii D四株C.sakazakii进行测序,结果显示C.sakazakii A与C.sakazakii H的同源性最高。将四株C.sakazakii分别在4℃、25℃、37℃、44℃、55℃、72℃下培养,结果显示C.sakazakii在4℃下菌落总数几乎没有变化,25℃下菌落总数略有增加,37℃为C.sakazakii最适生长温度,44℃下C.sakazakii表现出不同的热抗性,C.sakazakii虽然具有一定的热抗性,但是在55℃下菌落总数有明显减少,并且无法在72℃及其以上温度下存活。将四株C.sakazakii分别利用1.5%氢氧化钠、1.5%硝酸、75%酒精、1.5%洗衣粉、1.5%SDS及1.5%过氧乙酸处理,结果显示1.5%过氧乙酸的杀菌效果最好,1.5%氢氧化钠、1.5%硝酸和75%酒精的效果次之,而1.5%洗衣粉和1.5%SDS对C.sakazakii几乎没有效果。利用ERIC-PCR方法建立指纹图谱比较四株C.sakazakii之间的差异性,结果显示分离自地漏中的C.sakazakii D与其它三株菌的差异较大。通过试验得出以下结论:(1)工厂采样分离出的不同来源C.sakazakii通过16SrDNA测序,建立系统发育树发现,四株不同来源的C.sakazakii在基因序列上存在差异,分离自问题桶装婴儿配方奶粉中的C.sakazakii A与分离自回收细粉中的C.sakazakii H在系统发育树的同一支上,说明A与H的同源性最高。为了确定基因序列上的差异在四株C.sakazakii表型性质上的差异,通过在不同温度、不同清洗剂处理,四株C.sakazakii也表现出差异,分离自回收细粉的C.sakazakii H与分离自地漏的C.sakazakii D具有更高的热抗性和清洗剂抗性。由于四株C.sakazakii基因组重复序列有所不同,所以可以采取ERIC-PCR方法对C.sakazakii进行溯源分析。(2)通过本文试验研究结果显示,可以利用72℃及其以上温度的水与1.5%氢氧化钠、1.5%硝酸、75%酒精、1.5%过氧乙酸配合对工厂各个加工环节进行清洗,控制C.sakazakii的污染危害。