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目的:近年来,放射治疗(radiotherapy,RT)对原发性肝细胞癌的(Hepatocellular Carcinoma,HCC)疗效日益显著。但我国肝癌放疗的疗效还有待于进一步提高,主要影响因素为:一、肝癌属于放射中度敏感肿瘤;二、肝脏属于放射敏感器官;三、我国肝癌患者多合并病毒性肝炎,肝功能基础较差。肝脏所接受的放射剂量,在达到损伤肝癌细胞的治疗目的之前,就有可能引起较为严重的放射性肝损伤。因此,阐明调控肝癌细胞放射敏感性的相关机制、增加肝癌细胞放射敏感性、提高肝癌放疗疗效仍是目前亟需解决的热点问题。ADAM9是一种广泛存在于细胞表面的锌依赖跨膜蛋白,已有多项研究表明其能够促进肝癌的发生发展,但其与肝癌细胞放射敏感性的关系尚未有相关报道。本实验通过慢病毒感染降低或过表达肝癌细胞的ADAM9蛋白,观察经X线照射后肝癌细胞的细胞增殖、克隆形成、裸鼠皮下成瘤等细胞生物学行为的变化以及相关蛋白的表达,探讨ADAM9与肝癌细胞放射敏感性的关系,为增强肝癌放疗敏感性寻找新的分子靶点提供理论支持。方法:分别构建ADAM9蛋白过表达和敲除的慢病毒载体。将ADAM9敲除慢病毒载体转染至肝癌细胞株MHCC97H,并与空载组形成对照;并且同理将ADAM9过表达慢病毒载体转染至肝癌细胞株Huh-7,并与空载组形成对照。运用Western blot实验验证ADAM9蛋白敲除以及过表达的效果。取敲除或过表达成功的细胞株与其相应的对照组细胞在相同条件下经6MV X线4Gy照射。运用CCK-8实验检测其细胞增殖能力;运用琼脂克隆形成实验研究其集落形成能力;运用裸鼠皮下成瘤实验探究其生长能力;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及DNA损伤相关蛋白γ-H2AX的表达变化,并进行统计学分析。结果:1.敲除ADAM9后肝癌细胞株MHCC97H的ADAM9蛋白的表达明显受到了抑制;过表达ADAM9后肝癌细胞株Huh-7的ADAM9蛋白的表达较空载组升高。2.CCK-8结果显示:与空转组相比,ADAM9蛋白敲除组的肝癌细胞株MHCC97H的细胞增殖明显减少(P<0.01);肝癌细胞株Huh7的过表达组与空转组相比,ADAM9的细胞增殖明显增多,差异具有统计学意义(P<0.01);3.琼脂克隆形成实验发现:ADAM9蛋白敲除组与空转组相比,克隆形成能力减弱,差异具有统计学意义(P<0.01);过表达组与空转组相比,克隆形成能力增强(P<0.01);4.体内裸鼠皮下成瘤实验结果显示:ADAM9蛋白敲除组与空转组相比,皮下成瘤能力减弱,差异具有统计学意义(P<0.01);过表达组与空转组相比,皮下成瘤能力增强(P<0.01)。5.Western blot结果显示,与空转租相比,敲除ADAM9蛋白后Bcl-2的蛋白表达明显降低,Bax和γ-H2AX蛋白表达明显增高;过表达组与对照组相比,Bcl-2的蛋白表达升高,Bax和γ-H2AX蛋白表达降低。结论:降低ADAM9蛋白表达的肝癌细胞经X线照射后,细胞增殖、克隆形成以及皮下成瘤能力均受到明显抑制,且Bcl-2的蛋白表达降低,Bax、γ-H2AX蛋白表达增多;而过表达ADAM9蛋白的肝癌细胞经X线照射后的细胞生长能力较对照组增强。综上,ADAM9蛋白与肝癌细胞的放疗敏感性呈负相关。