氨基糖苷类药物是一类作用于细菌核糖体,抑制其蛋白质合成的抗菌药物。由于这类药物具有高效、广谱、优良的药物动力学特性以及与其他抗菌药物有协同作用等特点,而成为抗革兰氏阴性菌感染的常用药物。2003年发现的质粒介导的16S rRNA甲基化酶耐药机制可以介导细菌对氨基糖苷类药物高度耐药,这类耐药机制在近年来屡有报导。虽然人类对该类抗生素的研究愈加深入,但仍难以改变细菌对其高水平耐药的现状。作为一类重要的抗生素,氨基糖苷类药物较早应用于食品动物养殖业的抗细菌治疗并且仍将继续使用,而食品动物与人类活动息息相关。淡水养殖中,水产品作为食品动物重要的一部分,目前国内外对其肠道菌的耐药研究还较少,本论文主要研究了广州市淡水养殖产品因16S rRNA甲基化酶基因引起的对氨基糖苷类药物的耐药现状,以及该类基因的流行特征情况,为此类研究补充数据。本实验以从广州市9个菜市场中采集到的157个水产品样品为研究对象,用加有阿米卡星和庆大霉素的麦康凯培养基对157个样品进行耐药表型筛选,并挑选不同形态的菌落进行分离纯化,最后从50个样品中分离到了59株耐药菌。经过鉴定,这59株耐药菌包括了54株大肠杆菌、3株嗜水气单胞菌和2株柠檬酸杆菌。PCR和凝胶电泳检测细菌16S rRNA甲基化酶基因携带情况,rmtB基因检出率为98.3%（58/59）,armA基因的检出率为1.7%（1/59）。琼脂稀释法对59株耐药菌进行MIC检测,其中对氨苄西林、庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、氟苯尼考、四环素、环丙沙星等9个药均高度耐药,耐药率在90%¹00%;对头孢噻肟、氯霉素、恩诺沙星及喹乙醇的耐药率在80%至90%之间;对粘菌素、磷霉素、替加环素、头孢西丁等药物则个别菌株耐药,耐药率均在15%以下。同时,PCR结果显示,除氨基糖苷类耐药基因外,β-内酰胺类、酰胺类、氟喹诺酮类耐药基因也有较高检出率。对耐药菌株进行脉冲场凝胶电泳（Pulsed Field Gel Electrophoresis,PFGE）、接合转移、S1-PFGE和rmtB基因的Southern blot实验,进一步研究16S rRNA甲基化酶基因的流行情况。通过PFGE分型,3株嗜水气单胞菌和2株柠檬酸杆菌分型结果均不同;另外,54株耐药大肠杆菌共可分成10个簇,其中一个簇包含了34株耐药菌,这些菌株来源于8个市场,其相似度达到了91.2%以上。在接合转移实验中,共得到10株接合子,可接合率为16.9%。这10株接合子均为rmtB基因,并且在这个过程中,其他耐药基因如bla_CTX-M-1G,oqxAB,floR和bla_NDM基因都能伴随rmtB基因发生共转移,这些共转移基因在转移至受体菌E.coli C600上后,也都成功表达,使接合子对相应的药物的MIC上升了4-256倍。S1-PFGE和Southern blot实验结果显示7株耐药菌的rmtB基因位于⁶6 kb至⁷7 kb大小的质粒上,剩余3株细菌的rmtB基因分别位于¹04 kb,¹38 kb,¹70 kb大小的质粒上。质粒复制子分型结果表明,这10个质粒均为IncF型。本研究数据表明,广州市市场水产源样品中,有携带16S rRNA甲基化酶基因的情况检出,并且以rmtB为主。在这些携带16S rRNA甲基化酶基因的细菌中,常常伴随着一个或多个耐药基因共存,介导细菌发生多重耐药。同时,这些多重耐药质粒可以进行水平传播,使不耐药的细菌获得耐药性。同时,这些细菌对农业部批准的渔用药普遍高水平耐药,在如此高压的抗生素环境中,细菌的耐药性可能会愈加严重。