GeXP多重技术在检测马铃薯病毒中的应用

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目的:本试验利用GeXP技术原理,以多重基因表达遗传分析系统作为平台,建立一种全新的快速检测马铃薯常见病害的方法。使用多重逆转录聚合酶链式反应方法,同时检测7种常见马铃薯病毒及1种类病毒。对该方法的应用做评价。方法:设计8种目标微生物各自的特异性引物,组建适宜多重RT-PCI检测体系。利用GexP系统方法,对8种目标微生物进行检测。验证引物的特异性,并不断优化多重反应体系及其反应条件。用体外转录制备的RNA作为样本,进行多重检测体系灵敏度测试。结果:通过筛选得到的各病毒引物扩增的片段大小与设计相符并且有较强的特异性,且各引物之间无交叉反应出现。多重体系及反应条件优化后,可同时扩增出目标核酸的特异性片段,同时检测出8种马铃薯病毒的灵敏度可达到103拷贝/uL水平。检测100个未知核酸样本,看出新建立的多重检测方法特异性强、灵敏度高。结论:成功建立一种马铃薯病毒病害检测的新方法。此法是把GeXP的多重反转录PCR技术作为平台的8种马铃薯病毒检测新技术,此方法与传统单一PCR比较,有较高一致性并且具有高通量、灵敏度高、快速等优点,对马铃薯病毒的检测、筛选及病害的调查、分析具有重要意义。为高通量、多靶基因检测提供了新思路。
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