【摘 要】
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该研究在构建了粪产碱菌nifA-lacZ表达载体pLAF624的基础上,采用双亲接合方法将nifaA-lacZ融合基因转入A1501中,研究了nifA基因在自身条件下的表达情况.在微好氧条件下,随着
【出 处】
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中国农业科学研究院 中国农业科学院
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该研究在构建了粪产碱菌nifA-lacZ表达载体pLAF624的基础上,采用双亲接合方法将nifaA-lacZ融合基因转入A1501中,研究了nifA基因在自身条件下的表达情况.在微好氧条件下,随着铵浓度的增加,nifA表达活性逐渐降低.在铵浓度为30mmol时,接合子A1501(pLAF624)仍保持80﹪的β-半乳糖苷酶活性.说明在高铵条件下nifA呈部分组成型表达.粪产碱菌nifA-lacZ融合基因的表达不受氧的抑制,在无氮和好氧条件下,呈组成型表达.完成了一段含有nifA绝大部分区域的1.8kb的DNA片段的核苷酸序列分析工作,在GenBank DNA序列库中的登记号为AF155934.粪产碱菌nifA部分缺失突变株的固氮活性低于野生菌的固氮活性,保持50﹪的固氮活性.nifH-lacZ融合基因在突变株中的表达远低于野生菌,但并不完全丧失表达活性,在固氮条件下nifA突变株的nifH表达活性仅为野生型的15﹪左右.根据已测定的nifA编码区核苷酸序列,采和Oligo 5.0软件设计一对PCR引物,分别对粪产碱菌野生菌和nifA部分缺失突变株的总DNA进行PCR扩增,结果发现野生型和突变株均具有一条1042bp的PCR特征带,初步确定粪产碱菌nifA基因可能是双拷贝或多拷贝.
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