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脉络膜黑色素瘤(choroidal melanoma，CM)是成年人最多见的眼内恶性肿瘤，CM转移后死亡率可高达50％。国内外尚无有效、统一的CM治疗标准。在我国CM的基础研究报导很少，主要以临床分析为主。
目的：
本课题比较人CM三种细胞的生长特点和抗原表达，研究人CM细胞VEGF、Fit-1、KDR的表达情况。运用RNAi技术阻断VEGF表达，采用VEGF siRNA质粒体外转染人CM细胞，检测VEGF siRNA对CM细胞增殖的影响，探讨VEGF siRNA抑制CM VEGF的意义及抗CM肿瘤生长、抗血管形成的效应，为临床治疗CM提供新途径。
方法：
1．体外培养人CM细胞(OCM-1、SP6.5、VUP三种细胞系)，观察细胞形态及生长特性；细胞爬片作HE染色、HMB45、S-100、Vimentin免疫组化染色；电子显微镜检测了解细胞的特点，为以后的实验奠定细胞学基础。
2．免疫组化和RT-PCR方法检测三种瘤细胞的VEGF及其受体的表达，明确它们是否表达及表达的程度。
3．采用人OCM-1细胞进行动物体内实验。观察OCM-1细胞植入裸鼠皮下后，肿瘤生长的方式、快慢等生物学特性，了解移植肿瘤VEGF、Flt-1、KDR蛋白的表达情况，与体外实验结果进行比较。
4．快速大量提取VEGF siRNA表达质粒p1.0CMV-VEGF siRNA，质粒经脂质体Lipofectamine<’TM> 2000转染OCM-1细胞，RT-PCR和ELISA检测转染后VEGF mRNA及VEGF蛋白被抑制的情况。
5．MTT法、流式细胞仪检测OCM-1细胞转染pLOCMV-VEGF siRNA后细胞增殖和凋亡的情况，探讨pLOCMV-VEGF siRNA转染对肿瘤细胞自身的作用。
结果：
1．三种CM细胞在显微镜下形态上具有一定区别，但多呈多角型、梭型、类上皮型。细胞核圆、大，分裂相多见。HMB45、S-100，Vimentin免疫组化显示，OCM-l和SP6.5细胞上述三种抗原均表达，vUP只表达Vimentin。电镜下三种细胞都可见早期黑色素颗粒。
2．三种CM细胞免疫组化示OCM-1、VUP细胞表达VEGF、Flt-1、KDR蛋白，SP6.5只表达VEGF；RT-PCR示，三种细胞都表达VEGF、Fit-1、KDR mRNA。
3．裸鼠皮下接种OCM-1细胞1—2周后，可见皮下瘤体形成，呈实质性肿块生长，瘤细胞排列较紧密，组织中可见较多坏死灶。组织切片经免疫组化检测能表达VEGF、Flt-l和KDR蛋白，能表达HMB45、Vimentin，不表达S-100。
4．DLOCMV-VEGF siRNA质粒转染OCM-1细胞24小时后，其对OCM-l细胞内源性VEGF mRNA表达的抑制率约为54％。ELISA检测显示，转染24小时后VEGF蛋白表达仅为空质粒对照组的47.2％。
5.OCM-1细胞被VEGF siRNA转染后，MTT法示pLOCMV-VEGF siRNA组细胞增殖较其他对照组受抑制。流式细胞仪检测显示，转染24、48、72小时后各组之间细胞周期均无明显差异。转染24、48、72小时后凋亡检测，各组之间无显著差异。
结论：
人CM三种细胞(OCM-1、SP6.5、VUP三种细胞系)的形态、黑色素瘤抗原表达略有不同；三种细胞均表达VEGF mRNA和蛋白；采用RNAi技术，质粒PLOCMV-VEGF siRNA经脂质体转染OCM-1细胞后，可以抑制VEGF mRNA和VEGF蛋白的表达，有望为CM治疗提供一种新方法。