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目的:观察枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)对小鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用与P38MAPK/P65NF-κB信号通路的关系并探讨其对学习记忆及运动协调缺陷的作用。 方法:1、观察枸杞多糖对小鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用 ①采用Longa法构建小鼠大脑左侧中动脉阻塞局灶性脑缺血损伤模型;②采用TTC染色观察枸杞多糖对脑梗死体积的影响;③激光散斑成像仪检测枸杞多糖对脑缺血损伤小鼠缺血侧大脑皮层血流灌注量的影响;④脑电记录议检测枸杞多糖对脑缺血损伤小鼠缺血侧大脑皮层总功率的影响;⑤尼氏染色、HE染色观察枸杞多糖对脑缺血损伤小鼠缺血侧脑组织病理结构变化的影响;⑥透射电子显微镜观察枸杞多糖对脑缺血损伤小鼠缺血侧脑组织超微结构变化的影响。 2、探讨枸杞多糖对小鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用与P38MAPK/P65NF-κB信号通路的关系 ①免疫荧光法检测枸杞多糖对脑缺血损伤小鼠缺血侧脑组织中星形胶质细胞、小胶质细胞活化的影响;②Western blot检测枸杞多糖对脑缺血损伤小鼠缺血侧脑组织中p-P38MAPK、p-P65NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10蛋白含量的影响;③RT-PCR法检测枸杞多糖对脑缺血损伤小鼠缺血侧脑组织中TNF-α、IL-1βmRNA含量的影响。 3、观察枸杞多糖对脑缺血损伤小鼠学习记忆及运动协调缺陷的影响 ①利用Morris水迷宫实验(Morris Water Mazetest)对脑缺血损伤小鼠学习记忆能力进行实验。Morris水迷宫实验包括定位航行试验(Place navigation test,PNT)及空间探索试验(Spatial probe test,SPT)。定位航行试验:用时6天,每天从4个入水点各训练1次。训练中从4个入水点随机选取一个,将小鼠面向池壁放入水中并记录小鼠寻找并爬上平台所需时间(逃避潜伏期)。空间探索试验:第6天最后一次航行实验完成后,撤除平台,然后将小鼠面向池壁放入平台所在对面象限中,记录小鼠在120秒内穿过原平台所在象限的次数、在目标象限运动时间比和探索轨迹。②Bederson评分、转棒实验、握力实验检测枸杞多糖对脑缺血损伤小鼠运动协调障碍的影响。 结果:1、枸杞多糖对小鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用 与模型组比较,枸杞多糖(20、40mg/kg)组可显著增加缺血侧大脑皮层血流灌注量(P<0.05);枸杞多糖(20、40mg/kg)组与模型组比较,可显著增加大脑皮层总功率(P<0.05);与模型组比较,枸杞多糖(20、40mg/kg)组能显著减少脑组织梗死率(P<0.05);与模型组比较,枸杞多糖(10、20、40mg/kg)组可以减轻缺血损伤后脑组织病理性变化和神经元超微结构改变。 2、枸杞多糖对小鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用与P38MAPK/P65NF-κB信号通路的关系 免疫荧光实验结果显示,与模型组比较,枸杞多糖(40mg/kg)显著降低小鼠缺血侧脑组织中星形胶质细胞、小胶质细胞的活化;对比模型组,枸杞多糖(40mg/kg)组可显著降低p-P38MAPK、p-P65NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6蛋白含量在缺血区脑组织的表达(P<0.01)并能明显升高IL-10蛋白的表达(P<0.05);对比模型组,枸杞多糖(40mg/kg)能显著抑制缺血脑组织中TNF-α、IL-1βmRNA表达(P<0.01)。 3、枸杞多糖对脑缺血损伤小鼠学习记忆及运动协调障碍的改善作用 对比模型组,枸杞多糖(20、40mg/kg)组能显著减少脑缺血损伤小鼠逃避潜伏期(P<0.05)、增加目标象限时间比(P<0.05)和穿越平台次数(P<0.05);枸杞多糖(20、40mg/kg)组与模型组比较,可显著增加小鼠在转棒上运动时间(P<0.05);对比模型组,枸杞多糖(20、40mg/kg)组小鼠的握力评分和神经功能缺陷评分显著降低(P<0.05)。 结论:1.枸杞多糖对小鼠局灶性脑缺血损伤具有保护作用。 2.枸杞多糖可通过P38MAPK/P65NF-κB信号通路对小鼠脑缺血损伤产生保护作用。 3.枸杞多糖对小鼠脑缺血后学习记忆损伤和运动协调障碍具有保护作用。