鼠伤寒沙门氏菌(以下简称S.typhi)和单核细胞增生李斯特氏菌(以下简称LM)是目前引起食物中毒最常见的两种病原菌，主要通过污染乳制品、畜禽产品、熟肉制品、水产品和蔬菜等食品而感染人类，因此对人类健康构成极大危害。许多国家已将这两种菌列为严重的食品污染菌，并对进口的食品都要进行该菌的检测。为防止因食用污染了S.typhi和LM的食品而发生中毒事件，保证食品安全，急需开展这两种病原菌的快速检测方法的研究和检测试剂盒的研发。 本研究根据S.typhi的invE基因核苷酸序列设计一对引物，通过对PCR反应体系和条件的摸索，建立了检测S.typhi基因核酸的普通聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction，PCR)方法。PCR检测的特异性结果表明，7株S.typhi的PCR检测结果均为阳性，而10株非S.typhi检测结果均为阴性。对纯培养的S.typhi检测的敏感性可达3.0×102cfu/ml。4种人工染菌食品的模拟检测结果显示，当各食品中初始含菌量分别为1.5cfu/g(火腿肠)、2.4cfu/g(鲜猪肉)、1cfu/ml(包装鲜奶)和1cfu/g(鲜鸡蛋)时，分别经过6h、18h、12h和18h增菌，PCR检测为阳性，而阴性对照组均为阴性。 根据LM编码溶血素的hlyA基因核苷酸序列设计一对引物，首先建立了检测LM核酸的PCR方法，扩增片段大小约为858bp。特异性结果表明，11株非LM的PCR扩增结果均为阴性，该方法对纯培养细菌检测的敏感性为2.0×105cfu/ml。通过对该引物以及S.typbi引物的退火温度的摸索，建立了同时检测S.typhi和LM的二重PCR方法。 根据S.typhi编码肠毒素的stn基因核苷酸序列设计一对引物和荧光探针，建立了S.typhi核酸的荧光定量PCR(Real-timePCR)检测方法。在模拟样品的检测中，当各食品中初始含菌量分别为1.5cfu/g(火腿肠)、1cfu/g(鲜猪肉)、1cfu/ml(包装鲜奶)和1cfu/g(鲜鸡蛋)时，分别经过6h、12h、8h和12h增菌，PCR检测为阳性。检测结果与普通PCR的结果相符，但检测的敏感性有所提高，而且检测时间相对缩短。 综上所述，本研究成功地建立了检测食品中S.typhi核酸的普通PCR和荧光定量PCR检测方法，并建立了同时检测S.typhi和LM核酸的二重PCR方法，为研制快速检测食品中病原菌的试剂盒打下了良好的基础。