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甘蓝是常异花授粉作物,具有明显的杂种优势。本研究利用多种分子标记对甘蓝类蔬菜品种进行种质资源鉴定及遗传多样性分析,并对甘蓝主栽品种进行遗传纯度鉴定,通过建立标准DNA指纹图谱,进行新品种登记和品种鉴定、品种的真实性和纯度检验,对于良种质量检测、种子质量标准化、保护名优特种质及育成品种的知识产权和育种家的权益、种质的亲缘关系和分类与进化研究等,都将产生积极的推动作用。
本研究用RAPD、ISSR、SRAP、SSR等分子标记技术对甘蓝商品杂交种‘早夏16’进行了遗传纯度检测。以早夏16父母本及F<,1>为材料,基因组对157个RAPD随机扩增引物、72个ISSR引物、84对SRAP引物组合和44对SSR引物组合进行了分析,产生了父母本特异性标记约8个,3个RAPD引物NAURP2006,NAURP2020与NAURP2031,2个ISSR引物NAUISRl 058与NAUISR1062,1个SRAP引物组合NAUSR04/NAURS05,2个SSR引物组合NAUSSR1011和NAUSSR1031。这8个引物均能在F<,1>杂种中扩增出父母本特异标记。利用这8个能同时产生父母本特异标记的引物对纯度鉴定圃中的210个F<,1>单株进行了检测,结果显示,NAURP2006共检测到10个假杂种,NAURP2020、NAURP2031和NAUSSR1011检测到12个假杂种,NAUISR1058、NAUISR1062、NAUSR04/NAURS05和NAUSSR1031分析共检测到11个假杂种,其中有9个单株在这8个引物中表现一致,表现为仅产生了母本特异条带,推测是由于制种过程中母本自交产生的假杂种。标记分析结果与田问纯度鉴定结果高度一致,表明RAPD、ISSR、SRAP和SSR技术是鉴定甘蓝商品杂交种子纯度的稳定高效的方法。
利用RAPD、ISSR和SSR三种分子标记对甘蓝杂交种新夏50进行了遗传纯度的鉴定。利用83个RAPD引物、49个ISSR引物及56对SSR引物对新夏50父母本及F<,1>DNA进行了分析。引物筛选结果显示,2个RAPD引物(NAURP2068 and NAURP2079),2个ISSR引物(NAUISR1034 and NAUISRl062)和1个SSR引物(NAUSSR1011)在F<,1>杂种中同时产生了父本特异条带和母本特异条带,可以成功用于杂种遗传纯度的检测。利用这5个引物对杂种新夏50进行了基因型的检测。在所检测的228个F<,1>杂种单株中,有16个单株表现为假杂种,其中8个单株的电泳图谱与5个引物检测的母本带型一致,可能是由于母本自交所产生的假杂种。结果表明,RAPD、ISSR和SSR分子标记是杂交种种子质量控制过程的有效工具。
本研究利用RAPD、ISSR、SRAP三种分子标记技术对上海地区及其周边城市33个甘蓝主栽品种及1个青花菜、1个花椰菜品种进行了分析。从150个RAPD引物、64个ISSR引物及84对SRAP中挑选了多态性引物RAPD17个,ISSR20个,SRAP15对对35个甘蓝类品种基因组DNA进行扩增。RAPD扩增结果显示共产生了170条扩增带,平均每个引物扩增出10条,其中多态性条带124条,多态率为72.9%;ISSR扩增结果显示共产生159条清晰带,其中多态性条带123条,平均每个引物扩增出7.95条,多态率为77.4%;sRAP扩增结果显示共产生了157条扩增带,其中多态性条带为118条,平均每个引物扩增出10.47条,多态率为75.16%;说明35个甘蓝类品种内存在较高的多态性。其中引物me7-1/em11-1的多态性最高,有14条多态性条带,多态性条带的百分率为93.33%,该引物可以区分30个供试品种。利用其中两个引物NAURP1068和me7-1/em11-1在35个品种间扩增出的多态性标记可将全部品种鉴别。三种标记聚类图谱均显示青花菜、花椰菜与甘蓝品种遗传关系较远。研究结果表明RAPD、ISSR、SRAP三种分子标记技术均能有效地应用于甘蓝类蔬菜作物的品种鉴定,且利用多种分子标记综合分析甘蓝类品种之间的遗传关系更加准确、可靠。
根据本文的研究结果,表明分子标记(RAPD、ISSR、SSR、SRAP)是进行甘蓝类蔬菜品种指纹图谱构建、遗传多样性分析及种子遗传纯度鉴定的有效方法。但是由于不同的分子标记技术在基因组的分布及进化机制不同,从而导致其所检测的纯度结果及遗传进化关系存在些差异,因此在分析结果上可能也会出现差异。因此综合利用多种分子标记方法所得到的分析结果将更加准确、可靠。