前人研究表明羊毛弯曲的产生是受多种信号分子调控的结果。Dickkopf 1(DKK1)在哺乳动物毛囊生长周期及毛发发育中的作用已有较多研究,但是对羊毛弯曲的作用还未见报道。另有研究表明胰岛素样生长因子结合蛋白5(Insulin-Like Growth Factor Binding Proteins 5,IGFBP5)是毛发弯曲的标记基因,DKK1可能作为其上游基因对IGFBP5起调控作用,但调控机制尚不清楚。本研究主要通过探究DKK1和IGFBP5对羊毛弯曲形成的影响及DKK1与IGFBP5之间的调控关系来了解DKK1在羊毛弯曲形成中的作用。试验采用免疫组织化学、Western blot、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测DKK1和IGFBP5在本地绵羊和美利奴羊背部皮肤中的表达;利用体外添加及RNA干扰技术,在培养的绵羊角质形成细胞中添加或干扰DKK1来分析下游IGFBP5的表达。结果如下:1、DKK1蛋白在本地绵羊背部皮肤中强烈表达于毛基质、外根鞘以及皮脂腺中,微弱表达于毛乳头及表层细胞中;在美利奴羊背部皮肤中强烈表达于外根鞘和皮脂腺中,在毛乳头、毛基质、内根鞘及表层细胞中阳性反应较弱。光密度分析、Western blot和qRT-PCR结果显示DKK1在本地绵羊的蛋白和mRNA相对表达量均显著高于美利奴羊。2、IGFBP5在本地绵羊背部皮肤中,毛基质、内根鞘、外根鞘、皮脂腺及表层细胞强烈表达,毛乳头中不表达;在美利奴羊背部皮肤中强烈表达于毛基质、外根鞘、皮脂腺和表层细胞中,在毛乳头和内根鞘中阳性反应较弱。光密度分析、Western blot和qRT-PCR结果显示IGFBP5在美利奴羊的蛋白和mRNA相对表达量显著高于本地绵羊。3、添加不同浓度的DKK1蛋白到培养的绵羊角质形成细胞中,Western blot和qRT-PCR检测IGFBP5蛋白和mRNA的变化,其相对表达量均极显著低于对照组(P<0.01),且在添加10 ng/mL组下降最明显。4、转染干扰DKK1基因到培养的绵羊角质形成细胞中,Western blot和qRT-PCR检测IGFBP5蛋白和mRNA的变化,与对照组相比其相对表达量均升高,且差异极显著(P<0.01)。结果提示:1、IGFBP5在羊毛毛囊发育及弯曲形成过程中有重要作用,且可作为羊毛毛发弯曲的标记基因。2、DKK1和IGFBP5在羊毛弯曲形成中起调控作用。3、DKK1通过负调控IGFBP5而在羊毛弯曲形成中起作用。