新型纳米材料HPD作为基因载体的研究

来源 :北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mdyd888
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目的:研究新型纳米载体HPC-g-PDMAEMA (HPD)对于不同肿瘤细胞系的转染能力,初步探索HPD对于siRNA的运载能力以及HPD运载wt-p53对肿瘤生长的抑制效果,评价其在基因治疗及研究中的作用。方法:凝胶电泳分析HPD与pDNA的结合能力;HPD和Lipo 2K运载绿色荧光蛋白(GFP)质粒,分别转染MCF7、973、JF305三种肿瘤细胞系,采用流式细胞仪检测其转染效率;MTS检测HPD载体的细胞毒性;HPD和Lipo 2K运载针对GADPH的siRNA,转染MCF7,利用RT-PCR检测其RNA转染效率;构建pEGFP-C1-p53重组质粒,HPD和Lipo 2K分别携带该质粒转染MCF7细胞,利用MTS方法评价其对于肿瘤细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪分析细胞周期。结果:1.当N/P比值大于等于10时,HPD与pDNA具有较好的结合能力。2.当N/P比值为12时,HPD和pEGFP-C1质粒复合物转染MCF7.973和JF305的效率分别为32.4%、28.3%和15.1%,高于其他N/P值时的转染效率。在乳腺癌细胞MCF7中,HPD载体的转染效率高于Lipo 2K;对肺腺癌细胞973,二者转染效率相近;对胰腺癌细胞JF305, Lipo2K的转染效率高于HPD。3.当N/P比值为12时,MCF7、973、JF305三种细胞的相对增殖率分别为86.8%、89.2%、89.7%,毒性级别为1级,载体对细胞无毒性。4.在MCF7细胞中,利用HPD进行RNA转染,效率低于Lipo 2K。5.成功构建了pEGFP-C1-p53重组质粒,,western blot鉴定有外源性p53的表达。6. HPD/pEGFP-C1-p53复合物对于MCF7细胞增殖的抑制作用高于Lipo 2K/pEGFP-C1-p53组,p53能够通过细胞周期阻滞抑制MCF7的增殖。结论:HPD作为新型纳米载体,细胞毒性较低。对于乳腺癌细胞系MCF7,HPD/DNA nanoplexes具有较高的转染效率,还能够携带wt-p53抑制MCF7的增殖,是良好的基因载体。
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