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前言 乙型肝炎病毒(HBV)感染过程是由宿主的抗病毒免疫反应决定的,体液免疫反应,尤其是表面抗体,是清除病毒的必要条件,而细胞免疫反应对于清除病毒更为重要,但由于HBV特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对感染了乙肝病毒的肝细胞具有溶解作用,因而细胞免疫也是造成肝脏损害的原因。由于宿主免疫反应不同,HBV感染在临床上可引急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎和HBsAg携带者等不同临床类型。 IL-12对非特异性免疫和特异性免疫都发挥重要作用,IL-12架起非特异性免疫与特异性免疫之间的桥梁,是一种前炎症细胞因子。由于IL-12对NK细胞的作用,最初发现时曾被称作NK细胞刺激因子(NKSF)。IL-12能强有力地诱导T细胞和自然杀伤细胞产生细胞因子,尤其是IFN-γ;它也是未激活的T和NK细胞的生长因子;而且能增强CTL及NK细胞的细胞毒性;最重要的是,IL-12能专一地促进Th1细胞的生成以及对CTL分化起作用。 关于HBV感染者血清或外周血单个核细胞(PBMC)培养上清液IL-12的检测报道较少,且都局限于慢性乙型肝炎及HBsAg携带者,关于急性肝炎目前尚未见报道。而关于慢性乙型肝炎及HBsAg携带者,Rossol报道其血清IL-12水平较健康人显著增高;提示IL-12产生能力未受损;JI W等报道慢性乙型肝炎病人血清及PBMC培养上清液IL-12水平较正常对照为低;两者报道结果不一致。我们的实验检测了急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、HBsAg携带者及正常人血清和PBMC培养上清液中IL-12水平,并探讨其意义。 材料及方法 我们选取7例急性乙型肝炎,9例慢性乙型肝炎,10例HBSAg携带者作为研究对象,10例正常人作为对照组。所有病例均符合2000年9月全国病毒性肝炎会议所制订的诊断标准,并除外其它肝炎病毒重叠感染。采取7Inl外周静脉血,ZInl分离血清,置一20t冰箱中保存待检。snil血肝素抗凝之后分离 PBMC,PBMC用Ficoll Hypaque密度梯度离心方法从肝素化血中分离。收集细胞并用 PBS洗两次。然后将细胞加人24孔培养板中,浓度为 IX 10‘细胞/孔加人 HBCAg门.5 fig/d人然后加人「MI至 id,在 5%CO。湿润条件下培养72小时,之后取其上清液置一20℃冰箱中保存待检。用ELISA方法检测血清及PBMC培养上清液中几一12水平。 结 果 1.血清IL-12检测结果:急性乙型肝炎2例阳性,5例阴性;慢性乙型肝炎 4例阳性,5例阴性;HBsAg携带者 1例阳性,9例阴性;正常人全部阴性。急性乙型肝炎血清几一12阳性率为 28.6%,慢性乙型肝炎血清IL-12阳性率为44.4%,HBSAg携带者血清见一12阳性率为10%,正常人血清见一12阳性率为0。结果提示慢性乙型肝炎患者血清兀一12阳性事(M.4%)明显高于正常人订<0.05人也高于急性乙型肝炎p8.6邮厂且两者均高于*KSAg携带者问0%厂但血清IL-12阳性率在急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎及 HBSAg携带者之间无统计学差异(P>0.05厂且在急性乙型肝炎、HBSAg携带者及正常人之间也无统计学差异 ·二·(P>0.05)。 2.PBMC培养上清液见一12水平:急性乙型肝炎PBMC培养上清液 IL-12水平为 121.09 t 97.43p牙Inl,慢性乙型肝炎 PBMC培养上清液几一12 7k平为 57.11。40.51pg/nd,HBsAg携带者PBMC培养上清液L-12水平为 25.4。15.86p吵l,正常人用一MC培养上清液 IL-12水平为 38.35。63.86pg/*。急性乙型肝炎和慢性乙型肝炎患者PBMC培养上清液中几一12水平明显高于 HBSA<携带者(P<0.05厂急性乙型肝炎与慢性乙型肝炎之间无显著差异(P>0.05人急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、HBSAg携带者与正常人相比无显著差异瞩>0.05人 3.急性乙型肝炎患者PBMC培养上清液中IL-12水平与其血清ALT和TBIL水平相关性,经Pearson直线相关分析表明R值分别为0.9奶及0.*9,P值分别为<O.01及<O.05,提示急性乙型肝炎患者PBMC培养上清液中见一12水平与其血清ALT及TBIL水平均呈显著正相关;慢性乙型肝炎患者PBMC培养上清液中见一12水平与其血清 ALT和 TBIL水平相关性,经见。on直线相关分析表明R值分别为0.952及0.634,P值分别为<0.of及<0.05,提示慢性乙型肝炎患者 PBMC培养上清液中见一12水平与其血清ALT及TBIL水平均呈显著正相关。 讨 论 几一12有能力诱导T细胞和NK细胞分泌IFN-Y,并能够启动m 反应,这些性质提示几一12在抗病毒兔疫中起重要作用。HBV感染的病理过程以及个人临床过程受宿主抗病毒免疫的影响。目前认为参与免疫的T淋巴细胞的不同是引起宿主免疫反应差异的主要原因。人类CD;淋巴细胞被分为W* * 细胞。Tho向Thl细胞分化需要依赖IL-12、IFN-y,Tho向’I’hZ细胞分 ·3·化需要几一4、IL-10。 自限性急性乙型肝炎病人PBMC中对HBCAg反应的T细胞大多数属于Thl亚群,能产生IFN-y,而不产生几一4。慢性乙