人白介素-11(Interleukin-11,IL-11)是分子量为21 kD的蛋白,具有造血调控,促进血小板生成等作用。为提高IL-11在体内的半衰期,研究室已构建了携带有HSA-IL-11融合蛋白编码基因的质粒pPIC9K-HSA-IL-11,并在Pichia pastoris GS115中成功表达,但存在表达量低,降解严重的问题,该菌株生产潜力不大。本课题建立了一种筛选HSA融合蛋白高表达转化子的方法,并应用该方法筛选得到2株不同宿主的HSA-IL-11表达菌株,P. pastoris GS115-HSA-IL-11、P. pastoris SMD1168-HSA-IL-11,比较发现GS115菌株更适合表达本融合蛋白,产量高达178 mg/L,经优化后摇瓶表达量为220 mg/L,经过对两种不同转化子的发酵上清进行western blot验证,结果显示表达产物为完整的HSA-IL-11蛋白。在5 L发酵罐上进行工艺放大,讨论了发酵培养基的不同氮源,发酵诱导阶段的甲醇流加方式,诱导阶段的培养基pH值及诱导温度等对目的蛋白表达的影响。最终确立工艺为:使用有机氮源作为发酵培养基,采用连续式的甲醇流加方式,诱导培养基的pH值为6.0,诱导温度降至20℃,此时降解得到一定程度的控制。最后对融合蛋白HSA-IL-11的纯化条件进行摸索,超滤浓缩后,通过染料亲和层析层析、疏水层析和阳离子交换层析三步,可得到纯度大于90%的HSA-IL-11融合蛋白纯品,纯化过程的总回收率约为17%。经测定其生物学活性为1.15×105 AU/mg。