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激活素（Activin）是转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）超家族成员，具有多种生物学活性，在许多器官和组织均具有重要的作用。Activin受体属于丝氨酸/苏氨酸（Ser/Thr）激酶型受体，Activin与细胞膜上II型受体（ActRII）结合后，再结合并磷酸化I型受体（ActRI），进而激活下游Smad蛋白，通过Smad蛋白级联反应将信号传导入细胞核，激活相应靶基因。Activin在肝脏疾病发生发展过程中具有重要作用，研究表明Activin可诱导肝实质细胞凋亡及促进肝星形细胞（HSC）产生细胞外基质等，进而参与肝纤维化的形成。Activin主要包括Activin A、Activin B和Activin AB三种分子形式，Activin A被研究得最多且与肝脏有关。在病毒性肝炎、肝纤维化及肝癌等病变中Activin A表达异常，尤其肝纤维化时可检测到肝细胞中的Activin A表达增加，其可能主要来源于HSC。然而，Activin A及其信号传导蛋白在四氯化碳（CCl4）诱导的急性及慢性化学性肝损伤中的表达及其作用机制仍未阐明。本研究为了探讨Activin A在CCl4诱导小鼠急性及慢性肝损伤中的表达及其作用，采用腹腔注射CCl4的方法，建立了小鼠急性及慢性肝损伤模型，通过荧光实时定量PCR、免疫组织化学染色以及酶联免疫吸附实验等方法，观察Activin A、激活素IIA型受体（Activin type IIA Receptor, ActRIIA）以及激活素信号蛋白Smads在小鼠肝损伤过程中的表达；通过尾静脉注射抗Activin A及ActRIIA抗体阻断Activin A作用，探讨Activin A在肝损伤时的作用。主要研究内容包括：一、CCl4诱导小鼠急性及慢性肝损伤模型制备1. CCl4诱导小鼠急性肝损伤模型制备将适应性喂养7天后的72只C57BL/6小鼠随机分为橄榄油对照组及CCl4组。橄榄油对照组以10ml/kg体重橄榄油腹腔注射；CCl4组以5%CCl4橄榄油溶液（10ml/kg.BW）腹腔注射，于给药后1d、3d、5d和7d各取9只小鼠处死，取血清和肝组织进行检测。通过检测血清谷丙转氨酶及谷草转氨酶水平、肝组织HE染色验证肝损伤情况。结果显示，CCl4给药后1d，肝损伤最为显著，3d、5d及7d肝脏组织损伤逐渐修复。以上结果提示CCl4诱导小鼠急性肝损伤模型制备成功。2.CCl4诱导小鼠慢性肝损伤模型制备将72只C57BL/6小鼠，适应性喂养7天后，随机分为2组，橄榄油对照组以10ml/kg体重橄榄油腹腔注射；CCl4组以5%CCl4橄榄油溶液（10ml/kg.BW）腹腔注射，每周两次（周一和周四），连续六周，于停药后1d、3d、5d和7d各取9只小鼠处死，收集血清和肝组织，进行相关指标的检测。结果显示：CCl4停药后1d，肝损伤最为严重，masson染色显示肝组织有胶原沉积，随着停药时间延长肝脏组织损伤逐渐修复，但仍有纤维化存在。以上结果提示CCl4诱导小鼠慢性肝损伤模型制备成功。二、ActivinA及其相关信号分子在急性及慢性肝损伤时的表达酶联免疫吸附试验及荧光实时定量PCR检测急性及慢性肝损伤小鼠肝组织中ActivinA水平。结果显示，在CCl4诱导小鼠肝损伤组织中，Activin A mRNA及蛋白的表达水平升高，在1d、3d时升高最为显著，以后逐渐下降，同时显示血清Activin A水平在肝损伤小鼠也有类似变化，与血清转氨酶水平变化相似，提示Activin A的异常升高可能参与了CCl4诱导的肝损伤，且与肝损伤程度相关，血清ActivinA水平也可能具有辅助判定肝损伤的价值。在急性及慢性肝损伤中，ActR ⅡA及Smad3mRNA转录水平也升高，ActR ⅡA及Smad3与Activin A的表达呈正相关，在第7天基本恢复至正常水平。上述结果提示小鼠肝损伤时Activin A信号途径活化可能参与了Activin A介导的急慢性肝损伤过程。三、抗Activin A抗体和ActRIIA抗体阻断实验为了确定Activin A在急性肝损伤中的作用，实验采用抗Activin A抗体以及抗ActRIIA抗体阻断内源性Activin A作用及封闭ActRIIA作用，观察对CCl4诱导小鼠急性肝损伤的影响。利用C57BL/6小鼠建立动物模型，腹腔注射CCl42h后，尾静脉注射抗Activin A抗体或抗ActRIIA抗体，结果显示：应用抗ActivinA抗体阻断Activin A的作用或应用抗ActRIIA抗体阻断Activin A与IIA型受体结合，血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）水平均明显降低；HE染色发现与IgG+CCl4组相比，应用抗Activin A抗体+CCl4及抗ActRIIA抗体+CCl4组肝细胞病理损伤程度也较轻。上述资料提示Activin A途径参与了CCl4诱导小鼠急性肝损伤过程，可能通过抑制肝细胞DNA合成及肝细胞再生，加重CCl4诱导肝损伤及阻止肝损伤的修复。综上所述，Activin A高表达可能是加重CCl4诱导肝损伤的重要因素，Activin A信号途径活化参与了CCl4诱导小鼠急性及慢性肝损伤过程。因此，阻断ActivinA作用，对预防和治疗肝损伤具有重要意义。