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铅是一种严重的金属环境污染物,对于淡水鱼类有一定的毒性影响。包括铅在内的许多重金属可以进入鱼体内并且通过食物链进行富集,从而扰乱鱼类的正常活动,造成鱼类中毒或者死亡,最终对人类的健康造成威胁。但是目前对于重金属铅造成的淡水鱼类的中毒机制还不十分清楚。但它引起了广泛的生物学和生物化学等影响,例如引起酶活性的抑制,DNA合成阻碍,突变,染色体畸形,肿瘤以及繁殖障碍等。为了探讨铅对淡水鱼类的影响,本次试验采用醋酸铅染毒鲤鱼卵巢上皮细胞,并建立三个染毒剂量组:高剂量组(200μM·L-1)、中剂量组(100μM·L-1)、低剂量组(50μM·L-1)和空白对照组。采用24h、48h两个时间组,应用抗氧化物酶测定、脂质过氧化物测定、TUNEL染色和Annexin V-FITC PI双染色方法、PCR产物灰度分析,对细胞的氧化还原酶活性,细胞凋亡、细胞凋亡基因表达,首次系统的从细胞水平、分子水平进行铅对鲤鱼卵巢上皮细胞毒性的研究。研究结果显示:1随着染毒剂量和时间的增加醋酸铅可引起细胞的CAT、SOD、GPX、GR酶活性的抑制,各数据显著低于对照组(P<0.05)。MDA水平升高,与对照组相比差异显著(P<0.05)。结果表明醋酸铅作用可引起机体氧化损伤。2采用MTT法检测显示醋酸铅可引起鲤鱼卵巢上皮细胞增殖抑制,并且随着染毒剂量和时间的增加,其增殖抑制作用增强(P<0.05);通过细胞形态观察可看到显著的凋亡特征,并且随着剂量和时间的增加其特征越明显。采用TUNEL染色和Annexin V-FITC PI双染色方法可以检测到鲤鱼卵巢上皮细胞发生凋亡,并且随着染毒剂量和时间的增加其细胞凋亡数目也随之增加。结果表明醋酸铅可抑制细胞增殖,并且引起细胞发生凋亡3醋酸铅作用细胞后,通过RT-PCR的方法以及PCR产物灰度分析得出抑制凋亡基因Bcl-2的表达量与染毒剂量和时间呈现反向效应关系,随着染毒剂量和时间的增长,Bcl-2的表达量逐渐减少。结果表明:醋酸铅作用可引起细胞凋亡基因Bcl-2的表达下调。