【摘 要】
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光电化学(PEC)免疫分析是一种结合了PEC传感器的高灵敏度和免疫分析的优良特异性的检测方法,该分析方法基于免疫识别反应过程中伴随的光电流变化实现对目标分析物的定量检测,在疾病的早期诊断和预后治疗中起着重要的作用。近年来PEC免疫分析取得了一定的进展,但伴随着生命分析科学的不断发展,人们对PEC免疫分析的检测灵敏度提出了更高的要求。脂质体具有良好的生物相容性,作为分析过程中信号试剂的载体,能将一对
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光电化学(PEC)免疫分析是一种结合了PEC传感器的高灵敏度和免疫分析的优良特异性的检测方法,该分析方法基于免疫识别反应过程中伴随的光电流变化实现对目标分析物的定量检测,在疾病的早期诊断和预后治疗中起着重要的作用。近年来PEC免疫分析取得了一定的进展,但伴随着生命分析科学的不断发展,人们对PEC免疫分析的检测灵敏度提出了更高的要求。脂质体具有良好的生物相容性,作为分析过程中信号试剂的载体,能将一对一的生物识别事件转换为一对多的信号输出事件从而实现信号放大。综上所述,本论文将PEC免疫分析与脂质体相结合,开展了以下两个工作:1.基于量子点(QDs)脂质体的PEC免疫分析方法研究无机QDs敏化半导体纳米材料可以提高光捕获效率、有效地改善电子与空穴的分离,使半导体纳米材料的光电性能得到了很大的提升。与此同时,Ti O2纳米管(NTs)具有规则的周期性纳米孔结构和较大的比表面积等优良性能,在PEC生物分析中受到广泛的应用。因此,我们在脂质体与PEC免疫分析相结合的基础上,利用Ti O2 NTs与Cd S QDs之间的螯合/双齿配位作用,形成Ti O2 NTs/Cd S QDs复合电极,用于肌钙蛋白I(c Tn I)的灵敏检测。具体来说,我们将Cd S QDs包裹于脂质体内部,形成QDs功能化的脂质体(QDLL),偶联了抗体的QDLL在96孔板中发生免疫识别反应后,Cd S QDs从其内部释放出来并与Ti O2 NTs孵育,根据光电流的变化实现对c Tn I的超灵敏检测。通过标准加入法将不同浓度的抗原分别滴加到健康人血浆和PBS溶液中,两种溶液样品的信号差异非常小,说明该方法具有在实际样品中应用的可行性。将PEC免疫分析与脂质体结合,可以避免复杂的电极修饰步骤以及由此对电极造成的不可逆损伤。由于脂质体内部可包裹多种信号分子,外表面可与多种抗体相偶联,因此该方法是一种通用型PEC免疫分析方法,也可以应用于其他分子的检测。2.“点击化学”反应在脂质体PEC免疫分析中的应用研究在上一章检测模式的基础上,为了使PEC免疫分析更加接近临床诊断的标准,我们将无细胞毒性、尺寸与生物分子相当且PEC活性良好的聚合物纳米粒子Pdots与反应快速、高特异性的“点击化学”反应相结合,设计了一种光阴极信号增强型脂质体PEC免疫分析传感器。首先,将脂质体内部包裹大量末端修饰了叠氮基团的Pdots(N3-Pdots),外表面连接Ig G抗体,在96孔板内根据抗原-抗体特异性识别发生物识别反应后,将脂质体裂解释放出N3-Pdots,在Cu SO4和AA的共催化作用下,N3-Pdots与炔基化的ITO电极发生“点击化学”反应,根据光电流信号的变化实现对免疫球蛋白Ig G的检测。由于炔基和叠氮基团都被认为是生物正交的化学响应分子,实验结果表明该检测系统具有良好的选择性;同时“点击化学”反应的引入能够大大缩短光电活性材料与电极的孵育时间,明显提高检测效率,为PEC免疫分析能够快速的检测疾病标志物提供了希望。
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