【摘 要】
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β-木聚糖酶(β-Xylanase EC3.2.1.8)和β-甘露聚糖酶(β-Mannanase EC3.2.1.78)是分别能水解含有β-1,4-木糖苷键和β-1,4-D-甘露糖苷键的内切水解酶。它们广泛存在于微生物
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β-木聚糖酶(β-Xylanase EC3.2.1.8)和β-甘露聚糖酶(β-Mannanase EC3.2.1.78)是分别能水解含有β-1,4-木糖苷键和β-1,4-D-甘露糖苷键的内切水解酶。它们广泛存在于微生物、植物和低等动物中,在食品、饲料、造纸、能源以及环境保护等诸多方面均有重要的应用。本文采用基因工程技术对巨孢链霉菌和弗氏链霉菌来源的木聚糖酶和甘露聚糖酶基因进行克隆、表达与酶学性质研究,其结果如下:1.通过简并引物PCR及TAIL-PCR的方法,克隆得到来源于巨孢链霉菌DSM41476的木聚糖酶基因xynM4、xynM6和来源于弗氏链霉菌K11的甘露聚糖酶基因manS221。经BLAST比对和序列分析显示,3个基因与已知的核苷酸序列最高一致性分别为68%、53%、和66%,数据表明这3个基因都为新的编码基因。2.ManS221酶在大肠杆菌中表达,它的最适反应条件为pH6.0,52℃,且在pH5.5-8.0及45℃~60℃的范围内性质比较稳定。此外,它还对多种中性蛋白酶具有很好的抗性。3.XynM4、XynM6酶在酵母中表达。它们的最适pH和温度条件分别为pH 6.0、57℃和pH5.5、70℃。XynM4水解木聚糖的产物中木二糖的量约为86%。XynM6能耐高温,在50℃~80℃的温度范围内进行酶促反应时能保持60%以上的活性,它还能显著降低啤酒中麦芽汁的浊度和粘度。本试验为构建优质高产的基因工程菌株及其分子生物学研究奠定了良好的基础。
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