【摘 要】
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目的：观察淫羊藿次苷II（ICS II）对β-淀粉样蛋白25-35片段（Aβ25-35）诱导的PC12细胞凋亡的作用，并探究其可能的作用机制。 方法：将PC12细胞分为空白组、空白+ICS II高浓度组（25μM
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目的：观察淫羊藿次苷II（ICS II）对β-淀粉样蛋白25-35片段（Aβ25-35）诱导的PC12细胞凋亡的作用，并探究其可能的作用机制。 方法：将PC12细胞分为空白组、空白+ICS II高浓度组（25μM ICS II）、模型组（20μM Aβ25-35）、模型+ICS II低浓度组（20μM Aβ25-35+6.25μM ICSII）、模型+ICS II中浓度组（20μM Aβ25-35+12.5μM ICS II）、模型+ICS II高浓度组（20μM Aβ25-35+25μM ICS II）、模型+西地那非组（20μM Aβ25-35+20μM sildenafil）、空白+TrkB抑制剂组（10μM ANA-12）、ICS II高浓度+TrkB抑制剂组（25μM ICS II+10μM ANA-12）、模型+TrkB抑制剂组（20μM Aβ25-35+10μM ANA-12）、模型+TrkB抑制剂+ICS II高浓度组（20μM Aβ25-35+10μM ANA-12+25μM ICS II）、模型+TrkB抑制剂+西地那非组（20μM Aβ25-35+10μM ANA-12+20μM sildenafil），ANA-12在给予ICS II前1h加入，作用48 h后，采用MTT法观察ICS II和ANA-12对Aβ25-35诱导的PC12细胞的影响；采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测乳酸脱氢酶（LDH）的漏出率和PC12细胞内PDE5的含量；通过流式细胞术、Mito-SOX染色法和TUENL细胞凋亡检测试剂盒分别检测细胞内活性氧（ROS）含量、线粒体内ROS含量和细胞凋亡情况；采用蛋白免疫印迹技术检测Bcl-2、Bax、pro-caspase-3、active-caspase-3、BDNF及TrkB的蛋白表达，CREB的磷酸化水平。 结果：模型组较空白组PC12细胞活力显著降低（P<0.01），LDH漏出率（P<0.05）和细胞凋亡率（P<0.01）均显著上升；细胞内和线粒体内ROS含量（P<0.01）及细胞内PDE5含量（P<0.01）显著增加；线粒体凋亡通路Bax（P<0.05）、active-caspase-3 （P<0.01）表达升高，Bcl-2（P<0.05）、pro-caspase-3（P<0.05）、BDNF（P<0.01）及TrkB（P<0.05）表达显著降低，CREB磷酸化（P<0.05）水平明显下降。ICS II能够明显升高细胞活力（P<0.01）、降低LDH漏出率（P<0.05）及细胞凋亡（P<0.05），显著降低细胞内和线粒体内ROS含量（P<0.01）以及细胞内PDE5含量（P<0.05）；此外，ICS II显著下调凋亡相关蛋白Bax（P<0.05）的表达及active-caspase-3（P<0.05）水平，明显阻遏pro-caspase-3（P<0.05）水平下降，明显上调Bcl-2（P<0.01）、BDNF （P<0.05）及TrkB（P<0.05）蛋白表达并明显增加CREB的磷酸化水平。给予TrkB抑制剂后，ANA-12组较空白组或Aβ25-35组PC12细胞活力（P<0.05）明显降低，LDH漏出率（P<0.05）显著升高。 结论：在本实验条件下，ICS II能够明显改善Aβ25-35诱导的神经细胞损伤，其作用机制与调控BDNF/TrkB/CREB信号通路有关。
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