随着新型免疫抑制剂的不断涌现和手术技巧、器官保存以及围手术期处理的提高和改进，器官移植取得了巨大的进步，移植后长期生存病人日益增多，伴随着移植病人长期生存率的提高，慢性排斥(CR)导致的移植器官功能丧失已成为长期生存的移植病人主要的死亡原因，而目前，慢性排斥机理并未完全阐明，临床缺乏有效的治疗方法，因此，深入研究慢性排斥的机制和预防措施，对于器官移植进一步发展有着重要而迫切的意义。 本研究以大鼠小肠移植慢性排斥反应模型为基础，首先研究T细胞在慢性排斥中的活化状态，观察共刺激信号分子CD154、CD11a以及核转录因子NF—κB活性在T细胞中表达，阐明这些分子在慢性排斥中的作用，重点观察了n-3 PUFAs对慢性排斥反应中T细胞功能的影响以及这些分子的改变，试图阐明鱼油改善慢性排斥血管硬化和纤维化的分子机制。这一研究首次观察了n-3PUFAs对慢性排斥动物模型T细胞的作用，从共刺激分子角度研究n-3 PUFAs对慢性排斥反应作用的分子机制，有助于进一步理解鱼油对慢性排斥作用的分子机制，为鱼油的临床应用提供了理论基础。本研究共分为三个部分： 第一部分大鼠小肠移植慢性排斥反应模型的建立。为建立简单而又稳定的大鼠异位全小肠移植术式，简化手术操作和提高手术质量，本研究在Monchik和Russell建立的大鼠异位小肠移植模型基础上进行了改进，动脉吻合采用带腹主动脉补片的肠系膜上动脉端侧吻合于受体的腹主动脉，静脉吻合采用门静脉端侧吻合于受体的下腔静脉，移植肠近端结扎，远端造口于腹壁。共进行187次移植手术，其中正式实验27次，成功24例，手术成功率88.9％(24/27)，手术时间约2.5小时左右，其中动脉吻合时间17±5分钟，静脉吻合时间13±3分钟；移植肠热缺血时间29+5分钟。结果表明该术式简化了大鼠小肠移植手术，缩短了供肠获取时间，使动脉吻合更加方便、可靠，提高了手术成功率。高质量的供肠获取、血管吻合的质量和速度，有效循环血容量的维持和围手术期的处理，是小肠移植成功的关键。 第二部分大鼠小肠移植慢性排斥中共刺激信号分子CD154、CD11 a在T细胞中表达。实验动物和移植手术同第一部分。实验分组：笫一组：同基因移植对照组(n=6)：Lewis→Lewis：第二组：异基因移植排斥反应组(n=6)：F344→Lewis，CsA治疗同第一部分。于术后60天获取标本，分离T细胞，免疫印迹法(weslem bollling，WB)检测T细胞中 CD25、CD154和CD11a表达，电泳迁移率变动分析(electrophoretic mobilily shift assay，EMSA)检测T细胞中 NF—κB活性表达，酶联免疫吸附试验(enzyme—linked immunosorbentassay，ELISA)测定T细胞中IL-2表达水平。结果表明异基因组中CD25、CD154和CD11a农达明显上调，NF—κB活性增加，T细胞中IL-2表达水平上升。本研究表明慢性排斥中T细胞活性增强，T细胞活性增强可能是导致慢性排斥发生的重要原因，共刺激信号分子表达上调以及核转录因子NF-κB活性增强可能在慢性排斥中发挥重要作用。 第三部分n-3多不饱和脂肪酸对大鼠小肠移植慢性排斥反应模型T细胞活性及共刺激分子的的调节作用。在我们一系列的研究中，发现长期给予鱼油可以有效改善慢性排斥移植小肠血管硬化和纤维化，并证明鱼油中的主要成分n-3 PUFAs是这一作用的主要活性成分，本实验旨在观察n-3 PUFAs对慢性排斥中T细胞活性及共刺激信号分子和NF—κB活性的影响。实验分组：第一组PBS组(n=8)：F344→Lewis；第二组玉米油组(n=8)：F344→Lewis，：第三组鱼油组(n=8)：F344→Lewis。观察鱼油对移植肠中血管硬化和纤维化影响，同时WB检测T细胞中 CD25、CD154和CD11a表达，EMSA检测T细胞中NF—κB活性表达，ELISA测定T细胞中IL-2表达水平。结果表明鱼油可以有效改善移植肠血管硬化和纤维化，同时抑制T细胞活性和减低CD154在T细胞中表达，抑制NF—κB活性，但对CD11a表达无下调作用。本研究表明n-3 PUFAs在体内可以有效抑制T细胞活性和功能，这一作用可能与n-3 PUFAs抑制NF—κB活性，选择性减低共刺激信号分子CD154表达有关，这些分子事件的发生可能有助于鱼油改善慢性排斥血管便化和纤维化的发生。