鼻咽癌主要以东南亚黄种人发病率高,尤以我国南方为最,具有明显的地域聚集、种族易感性的特点,病因涉及EB病毒等微生物感染、遗传因素、环境及饮食等。现代分子生物学理论普遍认识到癌症与基因的密切关系。survivin是一个凋亡抑制蛋白家族(inhibitors of apoptosis protein (IAP) family)成员,广泛表达于人的胚胎组织和肿瘤组织,但仅在少数正常成人组织表达。survivin基因定位于染色体17q25上,含4个外显子和3个内含子。其编码链包含426bp的开放读码框。survivin的前体mRNA选择性剪接可产生至少4种不同的剪接变异体,在NCBI GenBank上可找到3种全长序列。survivin具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重功能,是联系细胞周期和细胞凋亡界面的重要因子,其生物学功能主要有:促进细胞增殖和分裂;参与血管生成;细胞分化功能;参与病毒感染、肿瘤形成等。作为最强的凋亡抑制因子,survivin对鼻咽癌的研究具有重要意义。RNA干扰(RNA interference,RNAi),即双链RNA(double-strandedRNA,dsRNA)介导的同源mRNA特异性降解过程。这是一个高度特异化的过程,涉及多种蛋白质的共同参与。在这一过程中,siRNA的结构影响其两条链装配到RISC中去的能力。除了与RISC结合外,siRNA还引导了RITS复合物结合到同源染色质,介导异染色质化过程。干扰效应的扩散,即系统性沉默可能依赖于跨膜蛋白的转运,并且很可能是在多因素调控下完成的。作为一种简单有效的影响基因表达和一定程度上替代基因敲除的遗传学工具,RNAi已在秀丽新小杆线虫、黑腹果蝇、拟南芥、红色面包霉菌等多种模式生物体中得到广泛证实。同时,RNAi的分子机制的研究也不断取得进展,包括对基因转录后水平、翻译水平、基因组甲基化及沉默信号的传递等层次的研究。清晰地阐明RNAi作用机理,将为大规模的基因系统筛查、新基因的发现、人类肿瘤及难治性疾病的基因治疗提供重要的理论依据和有力的工具。应用免疫组化、原位杂交、荧光定量RT-PCR检测64例鼻咽肿瘤组织和30例慢性鼻咽炎survivin蛋白、mRNA的表达情况及survivin基因相对表达量;荧光定量RT-PCR检测含人鼻咽癌细胞株CNE-2 survivin基因相对表达量; RNA干扰人鼻咽癌细胞株CNE-2,观察细胞增殖抑制和调亡情况。结果发现:鼻咽癌组织survivin蛋白、mRNA表达率为71.9%(46/64)、65.6%(42/64),以癌细胞表达(++)及以上(即>25%)为高表达的判断标准,则survivin蛋白、mRNA高表达率为59.4%(38/64)、46.9%(30/64),在慢性鼻咽炎组织中survivin蛋白、mRNA表达率为23.3%(7/30)、26.7%(8/30);以看家基因基因表达为内参照,CNE-2细胞株survivin基因相对表达量为2.48×10-3,鼻咽癌组织中survivin基因相对表达量为0～1.56,平均4.16×10-2。慢性鼻咽炎组织为0～2.20×10-3,平均4.42×10-4,鼻咽癌组织中survivin表达产物明显高于慢性鼻咽炎组织(均P<0.01)。在不同性别、年龄组患者鼻咽癌组织中survivin蛋白、mRNA表达率及survivin基因相对表达量无显著性差异(均P>0.05);Ⅲ+Ⅳ期鼻咽癌患者鼻咽部组织survivin蛋白、mRNA高表达率61.1%(11/18)、72.2%(13/18)分别高于Ⅰ+Ⅱ期患者50.0%(2/4)、50.0%(2/4)。通过对人鼻咽癌细胞株CNE-2进行RNA干扰后,我们发现,三条siRNA中,siRNA3: 5’-GGCAGUGGCCUAAAUCCUUtt-3’(正义链);5’-GUGUGACAGAUAAGGAACCtt-3’(互补链)对人鼻咽癌细胞株CNE-2 survivin RNA的干扰最有效,荧光定量RT-PCR结果显示,CNE-2细胞survivin基因相对表达量为3.42×10-12,远小于阴性对照和空白对照survivin基因相对表达量,分别为4.99×10-5、3.39×10-3。siRNA1干扰后,CNE-2细胞survivin基因相对表达量为4.83×10-5,和阴性对照无差异。RNA干扰后,噻唑蓝(MTT)法检测CNE-2细胞的生长增殖情况表明,一定浓度范围内,相同时间段,siRNA3浓度越高,对细胞增殖的抑制作用越强。浓度从12.5nM到100.0nM的siRNA3转染CNE-2细胞24h后,抑制率相应从5.38±0.71%到27.97±2.90%递增。噻唑蓝(MTT)法检测CNE-2细胞的生长增殖情况表明,一定时间范围内,相同浓度的siRNA3作用时间越长,对细胞增殖的抑制作用越强。50nm/L siRNA3转染CNE-2细胞24h、48h、96h后,抑制率随时间的增加而增加,分别为16.31±1.12%、52.12±2.90%、84.21±1.66%。流式细胞术分析siRNA3干扰对细胞凋亡结果显示,不同浓度siRNA3转染CNE-2细胞后,不同程度诱导CNE-2细胞凋亡。在12.5~100.0nM范围内,凋亡率随siRNA3浓度上升而相应递增,siRNA3浓度为12.5nM时,凋亡率为6.10±0.42%,而siRNA3浓度为100.0nM时,凋亡率为18.58±0.75%。以上数据显示凋亡抑制因子survivin在鼻咽癌中高表达,其表达与年龄、性别无关,survivin在鼻咽癌患者的疾病进展过程中可能起着一定的作用,survivin对鼻咽癌的诊断、判断病变进展、预后及生物治疗有重要的价值。通过破坏survivin RNA来抑制survivin RNA的生理作用和/或抑制survivin RNA→蛋白质的过程,能有效地抑制人鼻咽癌CNE-2细胞的增殖并促进其凋亡。survivin可能可以作为鼻咽癌RNA干扰这种生物治疗的靶分子之一。随着对survivin的深入研究,必将为鼻咽癌的发生发展机理提供重要依据,以survivin为靶分子的RNA干扰生物治疗手段也必将为治疗鼻咽癌作出重要贡献。