免疫系统的逃逸（或免疫耐受）对于癌症的进展、侵袭和对治疗的抵抗是至关重要的。在生理条件下,PD-1/PD-L1相互作用有利于免疫耐受的发展,通过免疫耐受机制防止可能导致组织破坏和自身免疫的过度免疫细胞活性。同时,PD-L1表达也是各种恶性肿瘤所利用的免疫逃逸机制,通常与肿瘤患者较差的预后有关。PD-L1在肿瘤中的作用主要有:引起中枢和外周的免疫耐受、组织细胞的免疫力衰竭以及调节抗癌免疫反应。PD-L1表达也被认为是对抗PD-1/PD-L1治疗反应的预测性生物标志物。大约20%³0%的非小细胞肺癌（NSCLC）,在其肿瘤样本和浸润的免疫细胞中表达PD-L1。PD-L1的表达存在广泛的细胞内和细胞间变化,这表明肿瘤组织的取样有可能影响PD-L1检测的结果。PD-L1在肿瘤细胞表达调控受多种因素影响,既有细胞内信号转导因素也有细胞外肿瘤微环境因素,此外还受表观遗传调节,有关调节过程极其复杂甚至有的相互矛盾。因此控制PD-L1在肿瘤细胞表达应多角度综合考虑。新型气体信号分子H₂S具有促癌和抑癌的双向“钟形药理学作用”,即较低浓度的H₂S倾向于促进癌细胞增殖,而较高浓度的H₂S倾向于抑制癌细胞增殖。体内H₂S的生物合成即可影响细胞信号通路的传递效应,也可通过肿瘤微环境影响细胞的生存状态。有关H₂S与肺癌瘤体生长或肺癌细胞增殖之间关系的研究,目前报道较少。本研究以NSCLC为研究对象,观察了临床NSCLC患者肿瘤样本的PD-1/PD-Ls表达特征,通过体外细胞实验研究了外源性H₂S（NaHS）对NSCLC细胞增殖的影响以及对NSCLC细胞PD-L1表达的调控作用,并进一步探讨了其机制。通过本研究结果,证实了以下科学假设:低浓度水平的H₂S可促进NSCLC细胞增殖,且H₂S促进NSCLC细胞的增殖效应与H₂S上调NSCLC细胞的PD-L1表达有关。研究内容包括三部分:第一部分PD-1及其配体在非小细胞肺癌的表达研究目的:了解PD-1及其配体在NSCLC患者的阳性表达率,分析PD-1及其配体的表达与患者临床病理特征的相关性。方法:以48例住院NSCLC患者的术后肺癌组织为研究对象,将每个患者的肺癌组织标本分别制成石蜡切片,应用免疫组织化学染色观察PD-1、PD-L1、PD-L2的表达情况,并进一步分析PD-1、PD-L1、PD-L2的表达与患者临床病理特征的关系。研究对象分为三组:PD-1组、PD-L1组和PD-L2组。每组的观察指标和评价内容相同。从患者的一般情况、PD-1及其配体的表达率、肿瘤的病理学特征三个方面对研究结果进行综合评价。结果:1.免疫组化染色显示PD-1在大部分位于肺腺癌间质和鳞状细胞癌的免疫细胞中表达,PD-L1和PD-L2在肺腺癌和鳞状细胞癌的癌细胞中表达。PD-1的阳性表达率为35.4%,PD-L1的阳性表达率为64.6%,PD-L2的阳性表达率为45.8%。PD-1、PD-L1和PD-L2的表达彼此独立。2.PD-1、PD-L1和PD-L2的表达均与患者性别、年龄无关（P>0.05）,与肺癌患者的生存时间无显著相关（P>0.05）;PD-1,PD-L1和PD-L2表达阳性的肿瘤患者的生存时间与阴性染色肿瘤患者的生存时间无显著差异（P>0.05）。3.PD-1和PD-L2的表达与患者的肿瘤组织类型、肿瘤分化程度、肿瘤分期或淋巴结转移状态无关;PD-L1表达与患者肿瘤组织学类型、肿瘤分化或淋巴结转移状态无关,而与肿瘤分期有关;PD-L1在III期非小细胞肺癌的表达明显高于I/II期非小细胞肺癌（P<0.05）。第二部分外源性H₂S对NCI-H1650细胞增殖及PD-L1表达的影响目的:检测不同浓度外源性H₂S在不同作用时间对NSCLC细胞增殖的影响,评估NSCLC细胞上PD-L1的表达情况。方法:应用NCI-H1650人非小细胞肺癌细胞系,用不同浓度的NaHS孵育细胞。根据NaHS浓度区别,将实验细胞分为四组:0μM组、50μM组、100μM组、200μM组。每组均设孵育24h、48h、72h三个观察时相。实验细胞传代培养至对数生长期后,使用MTT法检测细胞增殖情况,用流式细胞仪检测细胞PD-L1的表达水平。用光密度（OD）值反映各组细胞增殖情况,用相对平均荧光强度（MFI）表示每组细胞PD-L1的表达水平。结果:1.在相同的细胞孵育时间内,三种浓度的外源性H₂S均可促进NCI-H1650细胞增殖,且随着外源性H₂S浓度的升高,细胞的增殖量越来越明显,组间差异显著（P<0.05）。2.在相同浓度的外源性H₂S干预下,四组细胞都随着细胞孵育时间的延长而增殖增加,同浓度不同时间段的NCI-H1650细胞的增殖有显著差异（P<0.05）。3.流式细胞仪检测结果表明,在相同的细胞孵育时间内,外源性H₂S呈浓度依赖性促进NCI-H1650细胞PD-L1的表达,组间差异显著（P<0.05）。4.在相同浓度的外源性H₂S干预下,NCI-H1650细胞PD-L1的表达呈时间依赖性增加（P<0.05）。第三部分外源性H₂S上调NCI-H1650细胞PD-L1表达的机制研究目的:探讨外源性H₂S上调非小细胞肺癌细胞PD-L1表达的HIF-1α机制。方法:将人NSCLC细胞系NCI-H1650细胞培养至对数生长期。按干预措施的不同,将实验细胞分为4组:对照组、H₂S组、YC-1[3-（5’-羟甲基-2’-呋喃基）-1-苄基吲唑]组、H₂S+YC-1组。采用免疫荧光细胞化学技术测定每组HIF-1α的表达量,流式细胞仪检测每组PD-L1的表达水平。结果:1.H₂S组HIF-1α和PD-L1的表达显著高于对照组（P<0.05）。2.YC-1组HIF-1α和PD-L1的表达显著低于对照组（P<0.05）。3.与对照组比较,H₂S+YC-1组HIF-1α的表达显著降低,PD-L1的表达显著升高（P<0.05）;H₂S+YC-1组HIF-1α和PD-L1的表达比H₂S组均显著降低（P<0.05）,HIF-1α表达降低的更明显（P<0.001）;H₂S+YC-1组的PD-L1表达高于YC-1组（P<0.05）,H₂S+YC-1组和YC-1组之间的HIF-1α表达无显著差别（P>0.05）。结论:1.PD-L1表达与NSCLC患者肿瘤组织学类型、肿瘤分化或淋巴结转移状态无关,而与肿瘤分期有关;PD-L1在III期NSCLC的表达明显高于I/II期NSCLC。PD-1、PD-L1和PD-L2在NSCLC的表达彼此独立。PD-1、PD-L1和PD-L2的表达均与NSCLC患者性别、年龄、生存时间无显著相关。2.在H₂S浓度为0²00μM,孵育时间为0⁷2h的范围内,外源性H₂S以浓度依赖性和时间依赖性的方式促进NSCLC细胞的增殖和PD-L1的表达。外源性H₂S促进NSCLC细胞增殖的机制可能与其上调PD-L1的表达有关。3.外源性H₂S可通过上调HIF-1α的水平而促进NSCLC细胞PD-L1的表达;外源性H₂S上调NSCLC细胞PD-L1表达的机制尚有其它未明途径。4.减少H₂S在瘤体内的生成、抑制HIF-1α的表达可作为PD-L1功能阻断的有效措施,本研究结果可为新的抗癌药物研发以及癌症免疫治疗提供的新思路。