【摘 要】
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背景与目的:睾丸是典型的免疫豁免组织,却能有效的清除感染的病原体,睾丸细胞的天然免疫防御功能长期受到研究者的关注,其调节机理有待进一步揭示。Toll样受体(TLR)可以启动睾
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背景与目的:睾丸是典型的免疫豁免组织,却能有效的清除感染的病原体,睾丸细胞的天然免疫防御功能长期受到研究者的关注,其调节机理有待进一步揭示。Toll样受体(TLR)可以启动睾丸体细胞的天然免疫反应,然而在生精细胞中的表达和功能尚未做深入研究。本论文旨在系统研究TLR3在生精细胞中的表达和功能。材料与方法:分离止常C57BL/6小鼠各期生精细胞,使用其标记基因,包括精原细胞的标记基因Kit,精母细胞的标记基因联会复合体蛋白(synaptonemal complex protein2,Scp2),精子细胞的标记基因鱼精蛋白2(protamin2, Prm2);通过real-time RT-PCR,免疫组化及Western blotting技术分别在mRNA及蛋白水平上检测TLR3在生精细胞中的表达;利用poly(I:C)激活生精细胞中的TLR3研究其在生精细胞中的功能及信号通路。吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)混合染色,TUNEL染色及流式细胞仪分析生精细胞的凋亡。结果:发现小鼠生精细胞组成性的表达TLR3,主要定位于精原细胞和精母细胞,poly(I:C)可诱导精原和精母细胞产生多种炎症因子(包括IL-1p,IL-6和TNF-a),1型干扰素(IFNa, IFNβ)及抗病毒蛋白(OAS1, PKR, MX1),这种作用依赖于NF-κB和IRF-3的激活。另外TLR3的激活还可以诱导生精细胞的凋亡,这种作用可能是通过上调TNF-α实现的。体外实验证明TNF-α表现出双重功能:低浓度的TNF-α可以抑制生精细胞的凋亡,而高浓度的TNF-α可以促进生精细胞的凋亡。结论:TLR3表达于精原与精母细胞,生精细胞中TLR3的激活可以行使两方面的功能:一方面启动生精细胞抗病毒的天然免疫反应,另一方面可以诱导生精细胞的凋亡。为病毒感染干扰精子发生的机理提供了新的线索。
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