光是主要的环境信号,生物通过光受体接收光信号,进而影响生物的生长发育过程。平菇是我国栽培量最大的食用真菌,但对其光受体的研究极少,平菇中各种光受体基因也没有得到克隆。本实验以平菇新831菌株为材料,利用RACE及巢式PCR以平菇总RNA合成的c DNA为模板,克隆出平菇蓝光受体基因的3’和5’末端片段,并根据3’和5’末端拼接结果设计全长c DNA引物,然后通过PCR获得该基因的全长c DNA序列,采用半定量PCR及生物信息学方法初步验证和分析该基因的正确性及功能,以期获得平菇光形态建成机制,并为深入研究该基因功能及蓝光影响平菇生长发育的机理奠定基础。本实验取得的主要结果如下:(1)克隆全长c DNA后,分析发现该c DNA全长1725bp,含有一个1572bp的开放阅读框,共编码523个氨基酸。生物信息学分析发现,该基因属于光受体cryptochrome家族,因此本实验将该基因命名为Pcry(Pleurotus ostreatus blue light receptor cryptochrome)。另外,生物信息学分析表明其编码的蛋白是一种光信号蛋白,目的蛋白分子量为57.44KDa,等电点为4.90,且该蛋白具有信号转导及调控其它基因转录及结合发色基团的功能。(2)半定量表达结果分析显示,在平菇几个生长时期中,该基因(Pcry)在子实体中表达量最强,菌丝中最低;光照处理以后,该基因(Pcry)在蓝光照射后的菌丝中的表达量最强,黑暗培养的菌丝表达量最弱。这表明,该基因影响平菇生长发育过程,是平菇生长发育相关的基因。蓝光照射后该基因的表达量增加,说明蓝光能促进该基因转录,进一步证明该基因可以接收蓝光信号并参与了蓝光受体介导的基因表达调控。(3)用pEASY-E2原核表达系统进行该基因开放阅读框验证,结果显示该基因在原核细胞中可以表达,这说明该基因的ORF可以完整的表达。