第一部分OCA2基因rs74653330位点突变的黑色素细胞模型构建人类在进化过程中,皮肤颜色的变化是最典型的适应性表型特征,生活在不同环境和气候条件下的人群之间的肤色多样性非常高。通过比较基因组学研究,发现欧洲人群和亚洲人群祖先的肤色变浅是独立发生的进化事件,且两个人群中受到正向选择的肤色相关基因有显著差异。目前,绝大多数色素相关表型的遗传研究都在欧洲人群中进行,但在不同人群中,色素相关表型差异的原因和机制都可能不同。本实验室前期已利用在泰州汉族队列群体(3000例)中产生的全基因组芯片数据,对肤色、发色、眼色等表型进行了全基因组关联分析,发现OCA2基因上的rs74653330位点的A突变与肤色变浅显著相关。为了进一步验证这一突变位点对色素相关表型的影响,本实验采用CRISPR-Cas9的方法构建黑色素细胞模型,以用于后期功能验证实验。本实验成功构建了带有g RNA序列的重组p X459质粒,初步确定了g RNA产生的基因编辑效率。并在A375黑色素细胞系上确定了转染条件,由于A375细胞存在我们需要编辑位点的三体情况,后改用A2058黑色素细胞系进行实验。我们在实验过程中从不同细胞库购买的A2058细胞都存在支原体污染,本实验没能成功拿到阳性细胞单克隆,但该实验构建了OCA2基因上的rs74653330 SNP位点的定向突变黑色素细胞模型的实验体系,对以无污染细胞进行共转染、分选单克隆、筛选阳性细胞具有较大的指导意义。第二部分先天性眼球震颤相关SNP位点的研究眼球震颤是一种以眼球重复、有节律、不自主运动为特征的眼部疾病。由于持续的眼球运动,视觉功能显着降低,但视力损害的程度各不相同。该疾病可继发于其他视觉或神经疾病,或可作为先天性眼球震颤(CN)的独立遗传性状出现。先天性眼球震颤通常在出生时或在生命的头几个月内出现,估计年发病率为1/20,000。到目前为止,FERM结构域7基因(FRMD7)和G蛋白偶联受体143基因(GPR143)被鉴定为CN的致病基因。我们对一个6代CN家系中的4个个体(3个男性患者和1个女性携带者)进行全外显子扫描,发现了X染色体上5个新的可能与患病表型相关的SNP位点,它们分别是rs146443503、rs141478957、rs3810704、rs2233695以及rs2205912,这是之前的研究从未报道过的。为了验证这5个SNP位点的功能相关性,在这个CN家系中进行相关SNP位点的重测序。并对测序结果进行家谱性分析,以确定在该家系中CN的遗传方式以及解释SNP位点基因型与CN表型的关系。最后发现该CN家系中只有男性患病,女性只有携带者,且反映出明显的X连锁隐性遗传规律。通过测序结果分析遗传信息在家系中的传递,大致上可以说明患病表型与SNP位点突变的相关性。以前的致病基因研究通常限于FRMD7和GPR143,该研究发现无疑丰富了CN患病分子机制的解释,为可能的遗传咨询、产前诊断以及基因替代疗法提供了一定的参考。