目的:血管内皮生长因子VEGF能特异地促进血管内皮细胞增殖,使细胞免于凋亡,但VEGF对辐射血管内皮细胞的影响尚未阐明。因此,本课题研究血管内皮细胞的辐射生物学特性,并通过转基因技术,研究VEGF转基因细胞系的辐射生物学特征,从而为深入探讨放射性烧伤的愈合机理及其转基因治疗提供有意义的实验资料。 方法:通过~3H-TdR掺入法、微核法、RT-PCR、Western-blot等方法观察辐射后血管内皮细胞增殖、染色体损伤、VEGF mRNA及其蛋白表达的变化;建立转染VEGF正反义表达载体的血管内皮细胞系;应用MTT法、微核法和线粒体膜电位变化研究转染细胞系的生物学特性。 结果:血管内皮细胞受到不同剂量γ射线照射后,细胞增殖抑制率、细胞微核率(MNF、MNCF)以及VEGF mRNA转录和蛋白表达均增加,与剂量呈正相关性;当细胞受到8Gy照射6h后,VEGF mRNA转录就显著增加,并持续至72h。转染正义表达载体的ECV-304稳定细胞系经过4Gy γ射线照射后,与转染空载体的细胞相比,细胞增殖抑制率减弱,MNF、MNCF以及凋亡减少;而转染反义表达载体的细胞系与转染空载体的细胞相比,细胞增殖抑制率增强,MNF、MNCF以及凋亡增加。 结论:VEGF对血管内皮细胞具有辐射防护作用,本研究为今后放射性溃疡的转基因治疗提供了实验和理论依据。