肝组织工程用甘草次酸修饰壳聚糖硫酸酯酶交联水凝胶支架材料的制备及性能研究

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体外制备一种可移植的人工肝脏的肝组织工程,为恶性肝病的治疗带来了希望。肝组织工程的主要问题一是用于肝组织工程的支架要能诱导体内的血管新生,为新生的肝组织提供足够的氧气和营养物质,一是要能为肝细胞提供一个良好的生长环境,保证新生肝组织具有正常的肝功能。因此,本文从提高支架诱导血管新生能力和提高支架的肝细胞亲和性两方面出发,制备了一种含有对细胞有特异性结合性的甘草次酸(GA)的肝组织工程支架材料。   首先通过共价修饰制备了甘草次酸修饰的壳聚糖硫酸酯(SCTS-GA)、可酶交联的对羟基苯丙酸修饰的壳聚糖硫酸酯(SCTS-HPA),制备了壳聚糖(CTS)、羧甲基壳聚糖(CMCTS)、壳聚糖硫酸酯(SCTS)、SCTS-GA修饰的玻璃片材料,并在辣根过氧化物酶/过氧化氢(HRP/H2O2)存在制备了凝胶性能简单可调的酶交联水凝胶。   为了考察SCTS-GA材料的诱导血管新生能力,我们体外研究了人脐静脉内皮细胞(HUVEC)在CTS、CMCTS、SCTS、SCTS-GA上的粘附和增殖行为,发现SCTS有更好的细胞亲和性,并且GA的引入对增强了HUVEC粘附和增殖能力。体内研究了CTS、CMCTS、SCTS、SCTS-GA支架诱导血管新生的能力,结果显示SCTS能很好的诱导组织长入和血管新生,并且GA的引入对SCTS支架的诱导血管新生能力有一定的加强作用。与此同时,发现CTS、CMCTS支架在实验过程中因支架凝血造成了支架植入部位的皮肤坏死,经过分析我们发现具有抗凝血特性的SCTS可通过抑制血小板粘附表达抗凝血特性,从而保证了血管支架材料的安全性。   为了考察SCTS-GA作为肝组织工程支架材料的可行性,我们首先以易得的HepG2细胞考察了SCTS-GA对HepG2细胞的粘附和增殖行为的影响,结果显示含有GA的材料表现出了良好的细胞亲和特性。然后,我们制备了含有GA的多孔支架材料SCTS-GA,考察了支架中GA对原代鼠肝细胞功能的维持和球体形成的影响,结果显示,含有GA的支架材明显的促进了细胞的白蛋白、尿素的合成水平和支架中细胞球体的形成。   综上所述,我们用能够很好的诱导内皮细胞粘附和增值、具有一定的抗凝血特性和良好的组织相容性、诱导支架中血管形成的SCTS作为基质材料,并用对肝细胞的功能维持和球体结构形成有促进作用的GA为活性基团,制备了一种肝组织工程支架材料,有望为肝组织工程提供帮助。
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