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研究背景:脓毒性休克是常见的急危重症病,常常导致多器官功能障碍,其中心脏是常累及的器官。糖皮质激素作为临床常用的药物,应用于脓毒性休克治疗仍然存在较大的争议。目前指南推荐临床医师使用低剂量的氢化可的松,为了探索糖皮质激素对脓毒性休克早期心肌损伤的保护作用,我们开展了本研究。研究目的:探讨低剂量氢化可的松对脓毒性休克早期大鼠心肌损伤的保护作用及具体机制。研究方法:(1)将雄性健康SD大鼠72只,按照随机数字法分为正常对照组(n=24);脂多糖致脓毒性休克模型组(n=24);低剂量氢化可的松治疗组(n=24);正常对照组、脂多糖致脓毒性休克模型组、低剂量氢化可的松治疗组,又根据休克的不同时间点分为3组,0h、3h、6h(n=8)。(2)正常对照组大鼠在给予20%乌拉坦麻醉后,血压稳定之后开始计时,脂多糖致脓毒性休克模型组大鼠在休克后开始计时,低剂量氢化可的松治疗组大鼠在给予股静脉注射完氢化可的松开始计时;正常对照组右股静脉注射等量的生理盐水代替脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS),脂多糖致脓毒性休克模型组大鼠右股静脉注射LPS20mg/kg;低剂量氢化可的松治疗组在大鼠脓毒性休克模型建立成功的基础上,给予右股静脉注射低剂量氢化可的松5mg/kg。(3)连续监测各组大鼠血压、平均动脉血压(MAP)和心率(HR)。各组分别于对应时间点取大鼠动脉血行动脉血气分析、静脉血及心脏组织备用。通过酶联免疫吸附试验(Elisa)检测大鼠血浆中前列环素2(PGI2)及N末端B型脑钠肽前体(NT-pro BNP)表达水平;通过免疫印迹试验(Western blot)方法检测大鼠心肌组织天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)及核转录因子-κBp65(NF-κBp65)的表达量;苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠心肌组织的病理变化;通过原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测大鼠心肌细胞的凋亡率;免疫组化染色(IHC)检测心肌组织中心肌肌钙蛋白I(c Tn I)蛋白表达含量。研究结果:(1)大鼠注射LPS后约1小时MAP明显下降,之后缓慢升高,6h时显著高于正常对照组;而心率无明显变化;脂多糖致脓毒性休克模型组血乳酸(Lac)、BE、血浆NT-pro BNP水平、心肌组织Caspase-3和NF-κBp65表达随休克时间延长逐渐升高,均于6 h达峰值,且明显高于正常对照组;血浆PGI2水平表达随休克时间延长逐渐降低。(2)脓毒性休克早期予以低剂量氢化可的松治疗后,大鼠MAP呈上升趋势,Lac、BE缓慢下降,6 h时MAP、Lac、BE显著低于脂多糖致脓毒性休克模型组[MAP(mm Hg 1mm Hg=0.133k Pa):98.6±7.5比106.1±8.5,Lac(mmol/L):1.29±0.08比2.42±0.37,BE(mmol/L):4.45±0.57比8.18±1.03,P<0.05]。低剂量氢化可的松治疗后3 h和6 h,血浆NT-pro BNP水平及心肌组织Caspase-3和NF-κBp65表达均明显低于脂多糖致脓毒性休克模型组[NT-pro BNP(ng/L):2740.56±97.31比4425.60±743.32,2638.81±205.12比4993.01±373.78,Caspase-3/GAPDH:0.567±0.045比0.841±0.162,0.496±0.071比1.116±0.172,NF-κBp65/GAPDH:0.852±0.734比1.232±0.115,0.783±0.047比1.383±0.215,均P<0.05];低剂量氢化可的松治疗后6h,血浆PGI2水平表达明显低于脂多糖致脓毒性休克模型组[PGI2(ng/L):1.33±0.39比2.10±0.41,P<0.05]。(3)HE染色结果显示,脂多糖致脓毒性休克模型组心肌细胞发生断裂,炎性细胞浸润,细胞坏死;而低剂量氢化可的松治疗组心肌组织病理改变较脂多糖致脓毒性休克模型组明显减轻。TUNEL染色结果显示,脂多糖致脓毒性休克模型组心肌细胞凋亡增加,且心肌细胞凋亡率明显高于正常对照组[(82.41±1.57)%比(5.77±0.69)%,P<0.05];而低剂量氢化可的松治疗组心肌细胞凋亡明显下降,且心肌细胞凋亡率明显低于脂多糖致脓毒性休克模型组[(27.82±1.77)%比(82.41±1.57)%,P<0.05]。IHC染色结果显示,脂多糖致脓毒性休克模型组心肌组织c Tn I表达明显下降,且明显低于正常对照组,而低剂量氢化可的松治疗组c Tn I表达明显高于脂多糖致脓毒性休克模型组。结论:(1)脓毒性休克早期存在心肌损伤;(2)脓毒性休克早期给予低剂量氢化可的松干预,改善脓毒性休克早期血流动力学及微循环障碍;(3)低剂量氢化可的松应用于脓毒性休克早期,抑制血浆中PGI2保护血管系统,抑制NT-pro BNP改善心脏功能;(4)低剂量氢化可的松应用于脓毒性休克早期发挥保护性作用,机制可能是通过抑制心肌组织Caspase-3、NF-κBp65及增加c Tn I的表达,减轻炎症反应,减少细胞凋亡率,进而抑制心肌损伤和心肌微循环损伤。