玉米根中硝酸盐调节的MADS-box基因克隆及表达分析

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:pyking2003
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深入理解氮素调节根系发育的机制,对于提高土壤氮利用效率有重要意义。MADS-box转录因子在高等植物生长发育中起重要的调控作用,拟南芥中研究表明,MADS-box基因家族成员有很多受硝酸盐水平调节,其中AtANR1(aNO3-inducibleArabidopsisgene)可能是硝酸盐信号途径中的一环(ZhangandForde,1998,Science)。玉米与拟南芥根形态迥异,在玉米根中是否存在受硝酸盐调节的MADS-box家族基因?其功能又如何?本研究对此加以探索。 我们首先在NCBI中检索到与AtANR1保守序列的M区相似性达到96%的EST片段CF055827,通过3RACE的扩增得到CF055827编码区,推测CF055827编码89个氨基酸,分子量为10KDa。利用生物信息学技术对CF055827蛋白分析,发现它属于功能知之甚少的Ⅰ型MADSbox,但三维结构与AtANR1有非常大的相似性,进一步研究表明,该基因也受硝酸盐诱导。 在此基础上,我们分析了CF055827等11个MADS-box基因家族成员在玉米根中的表达及其对硝酸盐的响应。结果发现8个基因在根中表达。其中,CF055827和BM334225受局部硝酸盐诱导上调,AJ430695受局部供氮下调;AJ292959受体内氮素状况负反馈。 为更全面理解MADS-box基因的调节及功能,我们选择模式植物中AtANR1并对其启动子区元件进行了预测分析,发现AtANR1启动子区中存在光、干旱、伤害、赤霉素、生长素、乙烯、根中特异性、24小时生理周期等相关的顺式元件,说明这些因素对AtANR1有调节作用。随后我们成功构建了AtANR1启动子+GUS真核表达载体,为下一步利用AtANR1+GUS转基因植株研究该基因的功能及调控打下了良好的基础。
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