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将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae APP)血清1、5、7三型菌的参考菌株大量培养后回收菌体,经甲醛灭活后加入福氏完全佐剂制成疫苗,分别免疫健康的家兔,获得了针对APP菌单一血清型的抗血清。凝集效价达6~8log2。用此三型血清对2004年从山东省各地分离到的13株APP进行了血清型鉴定,结果分别为1型(1株)、5型(3株)和7型(3株)。 用App血清1、5、7三型菌对小鼠进行了致病性及免疫原性试验。三型菌对小白鼠的半数致死量(LD50)分别为1.46×105.5CFU、3.2×106CFU和3.4×106.23CFU。首次免疫小鼠两周后用试管凝集反应测得血清凝集价均为5log2,二免两周后试管凝集价分别达到6log2、8log2、7log2。首免两周后以100LD50菌液攻击相应血清型的小鼠可分别保护3/4、4/4、3/4,二免两周后攻击相同剂量菌液,攻毒保护分别为3/4、4/4、4/4。 利用PCR方法对App生物Ⅰ型ZY(App-1)株TfbA基因进行扩增、克隆和序列测定。结果表明:ZY株TfbA基因全长1782bp,编码594个氨基酸残基组成的多肽;将App ZY株与AP37(App-1)株、AP213(App-5)株和AP205(App-7)株的TfbA基因进行分析比较,结果表明ZY株与此三型菌TfbA基因的核苷酸的同源性分别为99.8%、74.4%和72.2%;氨基酸的同源性分别为99.7%、64.1%和58.6%。系统发育进化树分析结果表明ZY株与AP37株的亲缘关系最近。 分析组成TfbA蛋白N-端重叠的16聚体多肽发现了三个有转铁蛋白结合活性的区域,长度为13或14个氨基酸。第一和第三个区域在App-1、App-5、App-7型间变异较大,同源性很低,第二个区域在App-1型和App-5型两者之间同源性高,几乎相同。 本研究为该病的免疫防治奠定了基础。