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目的探讨透明质酸寡糖（hyaluronic acid oligosaccharide,o-HA）对糖尿病皮肤溃疡伤口愈合的作用及其抗氧化的初步机制。方法1、糖尿病皮肤溃疡小鼠模型制备:应用腹腔注射大剂量链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）联合全层皮肤缺损环形夹板构建糖尿病皮肤溃疡（diabetic cutaneous ulcer,DCU）模型,随机分为正常对照组（normal control,NC组）、糖尿病模型组（diabetic model,DM组）、重组人表皮生长因子阳性对照组（recombinant human epidermal growth factor,rh EGF组）、空白基质阴性对照组（matrix组）、低剂量o-HA治疗组（0.5%o-HA组）、中剂量o-HA治疗组（1%o-HA组）、高剂量o-HA治疗组（2%o-HA组）。根据空腹血糖水平判定糖尿病模型是否构建成功,根据创面病理特征观察DCU模型是否构建成功。2、o-HA促进糖尿病创面愈合药效学实验:DCU模型构建成功后,每组按照分组分别给予相应治疗,创伤后第1、7、14 d拍照记录创面愈合情况,并计算创面愈合率;采用H＆E染色和Masson染色观察创面组织形态学变化;应用免疫组织化学检测CD34的表达来评估血管新生情况,以评估在o-HA对糖尿病创面愈合药效。3、o-HA对糖尿病小鼠创面氧化应激的调节作用:采用硫代巴比妥酸法及黄嘌呤氧化酶法检测DCU小鼠血清中丙二醛（Malonic dialdehyde,MDA）水平和超氧化物歧化酶（Matrix metallo preteinases,SOD）活力;应用Western blot法从蛋白水平评估药物干预对DCU小鼠Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达的影响。4、o-HA对氧化应激条件下Haca T细胞的抗氧化作用:基于o-HA对DCU小鼠抗氧化的促愈合机制,以H2O2诱导角质形成细胞（human immortal keratinocytes,Haca T）氧化应激作为体外研究的模型,利用流式细胞仪及共聚焦显微成像技术分析ROS水平变化,应用Western blot法检测o-HA对抗氧化应激关键通路Nrf2信号通路的影响,进一步在细胞水平探讨o-HA抗氧化损伤的机制。结果1、动物造模结果:糖尿病模型构建后,糖尿病小鼠血糖显著高于正常小鼠,体重显著下降（p＜0.05）。与NC组相比,糖尿病小鼠出现多饮、多食、多尿、毛发暗黄、精神不振的表现。DCU模型构建后,糖尿病小鼠创面愈合延迟,上皮再生迟缓,胶原沉积不佳,新生血管减少,符合糖尿病难愈创面的病理特征。2、动物药效学结果:各时间点o-HA各干预组及rh EGF组创面愈合率均高于DM组及Matrix组（p＜0.05）,Matrix组与DM组相比无显著区别（p＞0.05）,o-HA不同剂量治疗组间在创面愈合率方面无显著性差异（p＞0.05）。HE染色和Masson染色观察到创伤后14 d,与NC组相比,DM组创面表皮菲薄,胶原纤维生成较少,o-HA干预后创面新生表皮增厚,成纤维细胞明显增多,胶原纤维生成增多且排列规则有序。CD34免疫组化染色显示o-HA组小鼠创面组织中毛细血管密度显著大于DM组（p＜0.05）,各给药组新生血管排列规律,管腔狭长,呈梭形,1%o-HA组新生血管较为明显,但三组间差异无统计学意义（p＞0.05）;DM组及Matrix组血管杂乱,零星分布。3、动物水平抗氧化机制初步研究结果:创伤后14 d,与NC组比较,DM组SOD活性明显降低,MDA含量升高。o-HA及rh EGF治疗后可提高SOD活性,降低MDA含量（p＜0.05）,其中1%o-HA组SOD活力、MDA含量基本恢复正常,与NC组相比无显著统计学差异（p＞0.05）。Western结果显示,与DM组相比,rh EGF、0.5%o-HA、1%o-HA组Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达明显上调（p＜0.05）,2%o-HA组Nrf2蛋白表达虽有增加,但差异无统计学意义。Matrix组Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达与DM组相比无统计学差异（p＞0.05）。4、细胞水平抗氧化机制初步研究结果:1 mmol/L H2O2刺激Haca T细胞3 h细胞存活率可下降至33.60%,10μg/m L o-HA预处理24 h,可以明显增高细胞存活率到59.30%。因此,选用10μg/m L的浓度进行o-HA抗氧化损伤机制的研究。流式细胞术和共聚焦显微成像结果发现,与NC组相比,H2O2组Haca T细胞中ROS、mt ROS产生显著增加,o-HA和Trolox处理后使Haca T细胞内ROS、mt ROS水平下降。Western blot结果显示o-HA上调Nrf2及其下游靶蛋白HO-1的表达。结论1、通过注射链脲佐菌素联合全层皮肤缺损环形夹板,成功构建了DCU模型,且与正常组相比,糖尿病小鼠创面愈合延迟。2、o-HA通过表皮组织再上皮化、刺激胶原纤维沉积和血管新生促进糖尿病小鼠伤口愈合。3、o-HA可使血清中MDA含量下降,SOD活力升高,并促使Nrf2信号通路相关的Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达上调,从而减轻氧化应激水平发挥促愈合作用。4、o-HA可以逆转H2O2诱导的Haca T细胞ROS增多,上调Nrf2、HO-1的表达而减少细胞内ROS的蓄积。