丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus, HCV)感染呈全球流行,据世界卫生组织(WHO)估计,全世界约有3%的人口(即1.7亿)感染HCV。目前,中国自然人群感染率约在0.9%-5.1%,平均约为3.2%,且呈增长趋势。HCV感染所致的丙型肝炎慢性化率高达75%～85%,可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化,部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌,对人类的健康和生命构成了严重威胁。HCV为单股正链RNA病毒且属于黄病毒家族成员。其基因组全长约9.5kb,分为5’非编码区(5’untranslated region,5’UTR)、编码区以及3’非编码区(3’UTR),其中5’UTR区、编码区中的核心区最保守,E1区、E2区最易变异。HCV高度变异导致其基因型和亚型的在全球呈区域性分布。我国大部分地区流行的HCV型别为1b型,其次为2a型,在南方城市1b型感染率占90%以上,从南向北2a型逐渐增多。HCV不同基因型、亚型与HCV感染者临床症状的严重程度、疾病的转归以及HCV的感染途径、地区分布规律等具有高度的相关性。此外,HCV基因型也是影响丙型肝炎患者干扰素治疗效果的重要因素之一。HCV感染时,体液免疫在抗病毒感染中作用较小,而CD4+T淋巴细胞反应起很重要的作用。人类白细胞抗原(]human leukocyte antigen, HLA) Ⅱ类抗原是由人类主要组织相容性复合体(najor histocompatibility complex, MHC)中II类基因编码的HLA蛋白分子,主要分布于B淋巴细胞、巨噬细胞和活化的T淋巴细胞表面,其功能是将外源性抗原肽递呈给CD4+T淋巴细胞。因此,HLA-Ⅱ类基因的高度多态性是决定宿主免疫应答能力的最重要的遗传因素。HLA-Ⅱ类抗原基因主要包括HLA-DR、DQ和DP三个亚区,每个亚区的基因结构都呈高度多态性。HLA-DP分子是MHCⅡ类抗原,为人类的主要组织相容性复合体中一种蛋白质/肽抗原受体,HLA-DP在抗原提呈和免疫应答中发挥着重要作用,HLA-DP分子在宿主清除病毒过程中发挥重要的作用,提示HLA-DP基因型可能在HCV感染的慢性化过程中扮演重要角色。本研究拟以HLA-DP基因多态性为切入点,进一步采用病例-对照研究在中国HCV高危人群中,探讨不同感染途径丙型肝炎患者HCV基因型的分布和HLA-DP基因多态性与HCV感染及其转归的关系。第一部分江苏地区不同感染途径丙型肝炎患者HCV基因分型的研究丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus, HCV)为单股正链RNA,其基因组分为5’非编码区(5’untranslated region,5’UTR)、编码区以及3’非编码区(3UTR),其中5’UTR区、编码区中的核心区最保守,E1区、E2区最易变异。HCV高度变异导致其基因型和亚型在全球呈区域性分布。HCV基因型对HCV感染的流行病学研究具有重要意义。此外,HCV基因型也是影响丙型肝炎患者干扰素治疗效果的重要因素之一。为此,本研究于2006年5月——2009年12月在江苏省收集505例不同感染途径的丙型肝炎患者,并对其进行HCV常见基因型分型检测,探讨江苏省HCV基因型在不同感染途径人群中的分布情况,为丙型肝炎的临床治疗提供科学依据。[目的]探讨江苏地区不同感染途径丙型肝炎患者病毒(HCV)基因型的分布及其与感染途径、肝功能的关系,为丙型肝炎的治疗策略和措施提供理论依据。[方法]按照Simmonds分型方法对505例不同感染途径的丙型肝炎患者进行HCV基因型分型检测并分析年龄、性别、肝功能以及感染途径与HCV基因型的关系。[结果]1.HCV基因分型检测结果505例HCVRNA阳性标本中,1a型占1.6%,1b型占68.9%,2型占4.8%,3型占7.9%,其它分型占16.8%。2.不同特征人群HCV基因型分布男性与女性的HCV基因型分布差异无统计学意义(χ2=4.94,P=0.08)；不同年龄人群中的HCV基因型分布差异亦无统计学意义(χ2=1.61,P=0.81)；不同HCV基因型人群的ALT.AST水平均无统计学差异(PALT＝0.64,PAsT=0.28)。3.不同感染途径患者HCV基因型分布情况不同感染途径人群的HCV基因型分布存在统计学差异(χ2=73.35,P<0.01)。[结论]江苏地区丙型肝炎患者HCV基因型以1b型为主,1a型HCV在中国大陆地区流行程度有扩大趋势,HCV基因型与其感染途径有关。第二部分HLA-DP基因多态性与HCV感染转归的关系丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)是单链RNA病毒,人体感染HCV后,遗传因素参与了机体免疫,可能影响疾病的易感性及病程的进展。HLA是迄今所知最复杂、多态性最高的免疫相关遗传系统,在人类的免疫应答反应中起着十分重要的作用。HLA-Ⅱ类基因分为经典HLA-DP-DQ、-DR和非经典的HLA-DM.-DO两类。HLA-DP由组成2个亚基,DPα和DPp的抗原。α链和β链的远膜区有一个抗原结合槽(antigen binding cleft),因此可以推钡HLA-DP基因的多态性可导致了抗原结合槽的构象、结合及递呈抗原肽给T细胞的效率不同。从而影响着免疫反应的强弱。目前国内外大量研究表明HLA-DP基因区域的某些多态性位点与个体更易导致感染HCV慢性化。然而,未发现有关于HLA-DP基因多态性与HCV感染转归的研究出现。本研究探讨HLA-DP基因多态性与HCV感染转归的相关性,为研究HCV感染的发生机制和临床治疗提供新的线索。[目的]探讨HLA-DP基因多态性与HCV感染转归的关系。[方法]采用病例-对照研究设计,收集1653例HCV高危人群,其中包括401例HCV持续感染者(HCVRNA阳性),268例HCV自限清除者(抗-HCV抗体阳性,HCVRNA阴性)以及984例健康对照者(抗-HCV抗体阴性),采用TaqMan-MGB探针技术检测HLA-DP单核苷酸多态性,比较不同基因型与HCV感染慢性化关系。[结果]1.一般情况比较本研究有研究对象共1653人,分别为对照组984人、自限清除组268人和持续感染组401人。三组的性别和年龄构成差异均无统计学意义(P性别=0.24,P年龄=0.07),但是三组之间的谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平以及高危人群种类分布差异均有统计学意义。2. HLA-DP基因多态性与HCV感染转归的关系将HCV感染组(自限清除组+持续感染组)与对照组进行比较,采用多因素Logistic回归分析,对性别、年龄和高危人群种类因素进行调整,估计HLA-DP突变基因型对HCV易感性的影响。rs3077位点分析结果显示：杂合基因型CT和突变型TT在感染组中的频率均高于对照组(调整OR和95%C1分别为1.31,1.05-1.64和1.93,1.36-2.73),提示杂合基因型CT和突变型TT可增加个体对HCV的易感性。rs2395309位点分析结果显示：杂合基因型GA和突变型AA在感染组中的频率均高于对照组(调整OR和95%C1分别为1.29,1.03-1.61和1.89,1.34-2.68),提示杂合基因型GA和突变型AA可增加个体对HCV的易感性。3. HLA-DP基因多态性与HCV自限清除的关系将HCV自限清除组与持续感染组进行比较,采用多因素Logistic回归分析,对性别、年龄和高危人群种类因素进行调整,估计HLA-DP基因多态性与HCV感染自限清除的关系。rs9277535位点分析结果显示：杂合基因型GA和突变型AA在持续性感染组中的频率均高于自限清除组(调整OR和95%C1分别为1.54,1.05-2.28和1.62,1.01-2.60),提示杂合基因型GA和突变型AA可降低个体自限清除病毒的能力。4.单倍型分析以HLA-DP基因3个SNP位点(rs3077, rs9377535和rs2395309)中均成功进行基因型检测的样本为研究对象,用PHASE2.0推断可能的单倍型及其频率。与最常见的单倍型CGG相比,含三个位点突变等位基因的单倍型TAA可以增加HCV的易感性(调整OR和95%CI为1.31,1.09-1.55)。[结论]HLA-DP基因多态性可能与丙型肝炎易感性及慢性化有关。