棉铃虫和烟青虫化学感受蛋白基因的克隆和表达

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xieming15898575325
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化学感受蛋白是一类保守的小分子量、可溶性蛋白。它们主要分布在触角、跗节、下颚须、下唇须等多种化学感受器官,同时在身体的其它非感受器官部位也表达,如腹部、表皮、胚胎、头部、性腺、喙和翅等器官。目前有关它们功能的研究甚少,主要认为它们在化学感受中起作用。  近缘种棉铃虫Helicoverpaarmigera和烟青虫H.assulta都是我国重要的农业害虫。其中棉铃虫是典型的广食性昆虫,而烟青虫是专食性昆虫。化学感受蛋白与两者的食性分化是否有关,至今还未有相关的报道。我们通过RT-PCR的方法分别克隆棉铃虫和烟青虫的CSP基因,通过大肠杆菌表达系统表达其中四个蛋白并制备多克隆抗体,一方面利用配体结合实验研究CSPs能结合的配体类型,另一方面利用免疫印记实验从蛋白水平上鉴定CSPs在两种昆虫及不同组织中的表达差异。主要研究结果如下:  1.在棉铃虫、烟青虫中共克隆到17个化学感受蛋白基因,它们的氨基酸序列与己报道的烟芽夜蛾Heliothisvirescens化学感受蛋白有高度的相似性。将克隆到的17条基因与其它己知鳞翅目夜蛾科以及一些双翅目、膜翅目、蜚蠊目昆虫的氨基酸序列进行比对并构建进化树,发现化学感受蛋白基因相当保守,尤其是形成二硫键的四个半胱氨酸位点。  2.从western印迹分析结果看,化学感受蛋白的分布部位广泛,如CSP11在烟青虫的喙管、跗节和雌性性器官中均存在。同时发现两种蛾子之间也存在差别,CSP11只在烟青虫的雌性性器官中表达,而在棉铃虫雌性性器官中未发现。另外,CSP11在喙管中的表达量极高,说明该蛋白可能在取食过程中起着重要作用。  3.在配体竞争试验中,CSP3的最适配体为12~15个碳原子的长链烃;CSP5能与棉铃虫和烟青虫的信息素组分顺9-十六碳烯醛(Z9-16:Ald)以及性信息素的合成前体物质顺9-十六碳烯醇(Z9-16:OH)结合;CSP9和CSP11则主要与14~18个碳原子的化合物结合。
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