论文部分内容阅读
目的:探讨EBV病毒BARF1基因对胃癌细胞生物学行为和相关基因表达状况的影响,及其在Wnt/β-catenin信号转导通路中的作用。方法:1)以pSG5空载体稳定转染的胃癌细胞系SGC-7901(SGC-pSG5)为对照,采用细胞计数法和FCM分析pSG5-BARF1重组质粒稳定转染细胞(SGC-BARF1)的增殖能力和细胞周期;以细胞计数法和DNA琼脂糖凝胶电泳法分析紫杉醇诱导后的细胞凋亡状况。2)以实时荧光定量PCR和免疫印迹法,分析SGC-BARF1细胞中bcl-2、cyclin D1、c-myc和c-met的mRNA和蛋白表达情况。3)用免疫印迹法分析SGC-BARF1细胞中β-Cat和GSK3β蛋白及其磷酸化水平。4)用PI3-K特异性抑制剂LY294002处理后,以免疫印迹法分析SGC-BARF1细胞中β-Cat、Cyclin D1和c-Myc蛋白,以及β-Cat蛋白的磷酸化水平。结果:1)与对照细胞组相比,SGC-BARF1细胞增殖速度加快,处于G0/G1期的细胞比例减少,而处于S期的细胞比例增高(p＜0.05);其抵抗紫杉醇诱导细胞凋亡的能力明显增强(p＜0.05)。2)与对照细胞组相比,SGC-BARF1细胞中bcl-2、cyclin D1、c-myc和c-met基因的mRNA和蛋白表达量均显著增加(p＜0.05)。3)与对照细胞组相比,SGC-BARF1细胞浆和细胞核内β-Cat蛋白水平均增加,胞浆内GSK3β蛋白减少,而胞核内GSK3β蛋白磷酸化水平提高。4)经LY294002处理后,SGC-BARF1细胞中β-Cat、Cyclin D1和c-Myc总蛋白量均明显减少,胞浆内GSK3β蛋白的量却相对明显增加。而SGC-pSG5对照变化不明显。结论:BARF1通过PI3-K激活Wnt/β-catenin信号转导通路,引起bcl-2、cyclin D1、c-myc和c-met等靶基因的表达上调,从而诱导胃上皮细胞的生物学行为的改变。