【摘 要】
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水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)侵染水稻,引起水稻白叶枯病(bacterial leaf blight,BLB)。Xoo主要依赖于III型分泌系统(Type III secretion system,T3SS)将效应蛋白(T3SS effectors,T3SEs)分泌到寄主细胞中,引起水稻的抗(感)病。T3SS由成簇的hrp基因编码,Hrp G和H
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水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)侵染水稻,引起水稻白叶枯病(bacterial leaf blight,BLB)。Xoo主要依赖于III型分泌系统(Type III secretion system,T3SS)将效应蛋白(T3SS effectors,T3SEs)分泌到寄主细胞中,引起水稻的抗(感)病。T3SS由成簇的hrp基因编码,Hrp G和Hrp X调控hrp基因的转录表达。为了准确研究Xoo与寄主植物、非寄主植物互作过程中hrp基因的转录表达,本研究以uid A为报道基因,构建了启动子探针载体p HG3,用于在转录水平和转录后水平检测hrp基因的表达。通过人工合成蛋白表达元件MCS-Flag,与终止子元件融合后,构建了蛋白表达载体p H3::flag。选取代表性的hrp基因hrp B1、hrc C,在人工合成培养基XOM3、寄主和非寄主互作环境中,通过GUS活性定量测定和Wesern blot的蛋白杂交试验,证明这2个载体能够有效应用于hrp基因的表达分析。为Xoo毒性调控网络的解析提供了有效的分子技术支持。为了揭示hrc C基因在Xoo致病性中的功能,本研究构建了hrc C缺失突变体和功能互补子,通过注射接种水稻、GUS定量测定、蛋白杂交、荧光定量PCR等实验,发现hrc C是Xoo在寄主水稻上的致病性和非寄主烟草上激发HR所必需的;hrc C的表达受Hrp G而不受Hrp X的调控,这种调控方式不是以直接结合的方式进行;Xoo和Xoc的hrc C功能能够互置。这些研究证明了Hrp G和Zur以平行的方式调控hrp基因的转录表达,为Xoo的毒性调控网络的解析,提供了新的线索。
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