秦皇岛产区酿酒葡萄病毒病的侵染情况调查及RT-PCR检测

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中国至今已报道14种葡萄病毒病,葡萄病毒病的发生严重制约了我国葡萄产业的发展。秦皇岛是我国重要酿酒葡萄栽培基地之一,有关葡萄病毒病在秦皇岛各葡萄种植区的发病情况罕有报道。为此,本论文主要开展了以下三方面研究:第一,调查了秦皇岛产区酿酒葡萄病毒病田间自然发病情况;第二,对疑似葡萄病毒病症状样品进行RT-PCR检测;第三,对本产区葡萄卷叶病毒3和灰比诺病毒的分离物进行基因序列分析。明确秦皇岛产区感染葡萄病毒病的种类,为该产区葡萄病毒病的防控奠定基础。研究结果主要有以下几点:1.本研究对秦皇岛产区5个葡萄园8个酿酒品种感染葡萄扇叶病(GFLV)、葡萄卷叶病(GLRaVs)、葡萄病毒B(GVB)和葡萄斑点病毒(GFKV)的情况进行田间调查。结果发现,(1)GFLV和GLRaVs在秦皇岛葡萄产区普遍存在,且GLRaVs发病率最高;(2)GVB仅在朗格斯酒庄葡萄种植园有发现;(3)在调查的葡萄园中均未发现GFKV表现症状。(4)各葡萄种植园和品种间感染GLRaVs的情况不同,耿庄葡萄种植园GLRaVs发病率较高于其它4个种植园,‘美乐’和‘西拉’两个品种GLRaVs的感染率较高。2.对秦皇岛产区7种病毒病的疑似症状样品进行了RT-PCR检测,在所检测的样品中,检出GFKV、葡萄灰比诺病毒(GPGV)、GLRaV3和GVB四种病毒,其中GFKV、GPGV和GLRaV3在所有调查葡萄园均有检出,总检出率分别为49.9%、59%和47.3%。GLRaV3在‘小味儿多’品种的检出率最高,为82.2%;GFKV在‘小味儿多’品种的检出率最高,为84.4%;GPGV在‘小白玫瑰’品种的检出率最高,为93.3%;GVB在‘霞多丽’品种的检出率最高,为6.6%。此外,供试品种检测出有含GLRaV3和GFKV二重复合侵染。在单一病毒RT-PCR检测的基础上,建立了GLRaV3和GFKV双重RT-PCR检测体系,并优化了检测条件。3.对获得的阳性样品的GLRaV3-HSP70和GPGV-MP基因测序分析,结果表明,本研究GLRaV3-QHD分离株与国内外已报道分离株的HSP70基因核苷酸序列同源性在96.3%~99.3%;GPGV-QHD分离株与国内外已报道分离株的MP基因核苷酸序列同源性在93.3%~98.4%。
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