【摘 要】
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研究背景和目的结直肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤,其发病率和死亡率在我国均居全部恶性肿瘤中的第5位。随着人们生活方式的转变以及人口老年化的加剧,结直肠癌的发病率正在显著上升,成为严重影响我国居民身体健康的一大疾病。结直肠癌早期无明显症状,多数患者发现时已属中晚期,治疗效果不佳。因此研究结直肠癌发生发展的分子机制,寻找有效的针对结直肠癌的诊断和治疗手段尤为重要。结直肠癌的发生发展是一个多基因参与、多因
【基金项目】
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国家卫生计生委公益事业专项科研基金（No.201502026）； 国家自然科学基金（No.81772964）； 广东省胃肠疾病临床医学研究中心（No.2017B020209003）；
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研究背景和目的结直肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤,其发病率和死亡率在我国均居全部恶性肿瘤中的第5位。随着人们生活方式的转变以及人口老年化的加剧,结直肠癌的发病率正在显著上升,成为严重影响我国居民身体健康的一大疾病。结直肠癌早期无明显症状,多数患者发现时已属中晚期,治疗效果不佳。因此研究结直肠癌发生发展的分子机制,寻找有效的针对结直肠癌的诊断和治疗手段尤为重要。结直肠癌的发生发展是一个多基因参与、多因素影响、多步骤演进的复杂的生物学过程,涉及癌基因的激活和抑癌基因的失活,其中转录因子亦发挥了重要的作用。HOXA6为同源盒基因转录因子家族成员,很多研究指出该家族成员与包括胃肠道发育在内的机体正常发育密切相关,因此其表达异常可能在包括结直肠癌在内的疾病中发挥重要作用。已有研究发现HOXA6在结直肠癌组织中的表达高于正常粘膜组织,HOXA6能够促进肠癌细胞的增殖和转移,但其中机制仍未阐明。miRNA是一类小分子非编码RNA,通过对基因的负性调控参与了包括结直肠癌在内的多种疾病的发生发展。很多证据亦指出同源盒基因能够从转录水平上调控miRNA的表达。因此在本课题中,我们将进一步明确HOXA6在结直肠癌发生发展中的作用,并探究其能否通过调控miRNA的转录从而发挥这种作用,以深入了解HOXA6影响结直肠癌增殖和转移的分子机制,为寻找结直肠癌的诊疗靶点提供理论依据。研究内容我们运用EdU、CCK-8、划痕实验、侵袭小室等细胞功能实验验证HOXA6、miR-193b-3p/miR-320a、LEF1在结直肠癌细胞增殖和转移中的作用;染色质免疫共沉淀、双荧光素酶报告基因实验探究四者之间的调控关系;qPCR、Western blot、免疫组化、原位杂交等方法检测这四个分子在临床组织标本的表达并分析其相关性。研究结果1.Western blot和组织芯片结果显示HOXA6在结直肠癌组织中表达高于正常粘膜组织;细胞功能实验显示HOXA6能够促进肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。2.miRNA测序提示HOXA6能够改变miR-193b-3p和miR-320a的表达水平;染色质免疫共沉淀和双荧光素酶实验证实HOXA6能在转录水平下调miR-193b-3p和miR-320a的表达;细胞功能实验显示HOXA6通过抑制这两个miRNA的表达促进肠癌细胞的增殖和转移。3.KEGG通路分析和qPCR提示miR-193b-3p和miR-320a能够下调Wnt通路相关蛋白;双荧光素酶实验证实miR-193b-3p和miR-320a能够下调LEF1的表达水平;细胞功能实验和体内实验显示这两个miRNA通过抑制LEF1从而抑制肠癌的增殖和转移。4.qPCR、Western blot、免疫组化、原位杂交结果显示HOXA6、miR-193b-3p/miR-320a、LEF1在临床组织中的表达具有相关性,且均与临床病理参数有关。研究结论HOXA6通过下调miR-193b-3p和miR-320a的表达间接促进了 LEF1的表达,最终促进了结直肠癌的增殖和转移。
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