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表面增强拉曼散射光谱(Surface-Enhanced Raman Scattering,SERS)是一种功能强大的光谱技术,已广泛被应用于生化检测。SERS标记方法是利用金或银等贵金属的粗糙表面来增强吸附在其表面的标记分子的拉曼信号,并将其作为示踪信号。与其他的光谱标记技术相比,标记分子在良好的SERS基底上其信号增强可以高达1014,因此极大的提高了检测的灵敏度,使得痕量被测物的检测成为可能。与此同时,拉曼光谱具有良好的分子特异性且谱峰窄,能够避免不同分子光谱之间谱峰的重叠,因而可用于多组分检测。本学位论文研究了适配体修饰的SERS探针和芯片在牛奶中三聚氰胺检测的应用以及SERS免疫探针和免疫磁分离在胰腺癌外泌体检测的应用。主要内容如下: 1.三聚氰胺(melamine)是一种含氮量较高的化合物,乳制品中非法添加三聚氰胺能够提高通过凯氏定氮法测定时的蛋白质含量。摄入超过安全限的三聚氰胺会在人体肾脏内形成难以溶解的三聚氰胺氰尿酸盐晶体,从而造成肾结石甚至肾衰竭。研究发现三聚氰胺(M)与胸腺嘧啶(T)会通过氢键特异性形成的"T-M-T"结构。基于此,我们利用修饰有富T适配体的SERS探针和芯片来检测三聚氰胺。该方法具有很高的灵敏度(最低检测限为1.0 pg ml-1)和特异性,并且能够用于牛奶样品中的检测。 2.外泌体(exosome)是细胞分泌的直径为30-100 nm的亚细胞双层膜囊泡结构,广泛存在于血液、尿液、乳汁等各种体液中。外泌体表面含有很多细胞膜表面的蛋白质。其中一类蛋白是外泌体中普遍存在的,另一类蛋白质与细胞来源有关,具有相对特异性。肿瘤细胞产生的外泌体中还可以检测到过度表达的蛋白质标志物。研究发现,胰腺癌细胞分泌的外泌体会过量表达Glypican-1蛋白,并且这一外泌体特异性的出现在胰腺癌病人体内。传统的外泌体分离方法为超速离心法,需要昂贵的机器和很长的操作时间。在该工作中,我们采用修饰了Glypican-1抗体的免疫磁珠分离胰腺癌细胞培养上清液中的外泌体,并用免疫SERS探针进行外泌体的检测。该方法能够特异性的识别胰腺癌的外泌体,并且操作更为简单,需要样品量较少。