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本实验用IPTG诱导含有猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）重组N基因质粒（PHN）的大肠杆菌DH5α，表达重组TGEV N蛋白，经Ni2+-NTA金属螯合层析柱纯化后获得纯化的N蛋白。对纯化条件进行优化，得到最佳纯化重组TGEV N蛋白的方法：将大肠杆菌DH5α菌体沉淀物经裂解液（含有1mmol／L PMSF）作用后，依次经过2倍体积的Buffer A（pH8.0）、Buffer B（pH6.3）和Buffer C（pH5.9）洗柱后，收集Buffer C（80mmol／L咪唑）洗脱产物。经SDS-PAGE分析分子量为47ku，Western-Blot检测呈阳性，纯化的N蛋白溶液经Bradford法测定蛋白质含量为154.7μg／ml-479.7μg／ml，推算每克大肠杆菌菌体沉淀物可获得纯化重组TGEV N蛋白1.52mg。 以重组TGEV N蛋白作为诊断抗原建立了两种检测抗体的诊断方法。在Dot-ELISA中其抗原最适包被量为1.25μg／点，抗原预点膜4℃可保存5周以上，特异性实验表明其与猪轮状病毒、猪流行性腹泻病毒等肠道腹泻性病毒均无交叉反应。在间接ELISA中，最佳抗原包被量为0.51μg／孔，封闭液为含5％脱脂奶粉的PBST，待检血清最适稀释倍数为200倍，作用时间为30min，底物液最佳作用时间为10min。 以纯化的重组TGEV N蛋白免疫BALB／c小鼠制备诊断用单克隆抗体。按常规方法进行细胞融合，用间接ELISA方法进行筛选，采用有限稀释法，经过3次克隆筛选，最终获得一株分泌抗重组TGEV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞（命名为E10F10D5），其染色体平均计数为87±10对，间接ELISA检测制备的腹水抗体效价达1:12800。以全病毒为抗原对杂交瘤细胞（E10F10D5）产生的腹水进行Western-Blot及间接ELISA检测分析，结果均为阳性。证明制备的单克隆抗体可以识别天然TGEV N蛋白的某一抗原表位。优化了裂解肠内容物中TGEV的方法。为建立诊断TGEV抗原的检测方法奠定了物质基础。 本研究首次在国内建立以重组TGEV N蛋白为抗原检测TGEV抗体的两种检测方法：DOT-ELISA和间接ELISA；制备了一株抗TGEV N蛋白的杂交瘤细胞系。为TGEV的疫情监测、及时而准确的诊断奠定物质基础。