实验目的 胰腺癌是消化系统相对少见的恶性肿瘤，但近年来其发病率有明显增长的趋势。在美国，胰腺癌的年龄调整死亡率从1920年的2.9／10万人口上升至1970年的9／10万人口，每年约有24500人死于胰腺癌(美国癌症协会，1988)。我国胰腺癌的发病率有上升趋势，手术切除率也可望提高，然而5年生存率则仍在5％左右。因此，在胰腺癌早期诊断方法尚未有突破的情况下，对胰腺癌中晚期病人，采用合理的综合治疗，提高病人的生存期和改善生活质量是现阶段临床外科医生应关注的问题。 端粒是真核线形染色体末端结构，由端粒DNA和端粒结合蛋白组成。它由一端高度保守的重复序列(TTAGGG)n组成的，方向5’-3’，长度约2-20kb。端粒长度的维持需要端粒酶的激活。端粒酶能以端粒3’端为引物，以其RNA组分为模板，人类端粒酶是有多个亚单位构成的核糖核蛋白，包括RNA组分(hTR)、逆转录催化亚单位(hTERT)和端粒酶相关蛋白(TP1)。hTERTmRNA特异性表达于大多数肿瘤组织中，而在正常组织中却无表达。Zhou JH等报道癌症的发生和端粒酶活性之间有相关性，并且hTERTmRNA表达水平和端粒酶活性相关，hTERTmRNA表达的增加可能在癌的发生过程中有重要作用。 由于端粒酶与恶性肿瘤具有高度相关性，肿瘤细胞经化疗杀伤或诱导分化后端粒酶活性显著的降低，其机理尚待阐明，但提示人们，针对端粒酶活性的药物可能为治疗肿瘤提供新的途径。故端粒酶抑制剂被认为是一种颇具潜能的抗肿瘤因子。并且端粒酶是肿瘤治疗很具特异性和普遍性的新靶点，以抑制端粒酶活性为目的的基因治疗，通过下调端粒酶活性达到抑制肿瘤细胞增殖，可望成为治疗恶性肿瘤的有效途径。本研究采用针对端粒酶催化亚单位hTERT基因的反义寡核苷酸，研究反义寡核苷酸对胰腺癌细胞Bxpc-3端粒酶活性的影响以及端粒酶hTERT基因作为胰腺癌基因治疗靶点的可能性。实验方法 本实验采用M竹法检测不同剂量反义寡核昔酸不同时间对细胞Bx拌一3增殖的影响，用TRAP一Elisa法检测对端粒酶活性的影响，采用流式细胞仪检测对细胞，DNA含量的分布。 统计学方法:数据用均数土标准差表示，运用S只治软件采用t检验和重复测量的方差分析进行组间均值比较。实验结果 正义寡核昔酸组与对照组的吸光度值之间无差异(F二0.013，P>0.05)，说明正义寡核昔酸作用组对细胞正常生长无影响。对照组与反义寡核昔酸不同剂量组之间的吸光度值有差异(F二35.347，P<0.01)，不同时间的吸光度值之间也有差异(F二22.661，P<0.01)。不同剂量反义寡核昔酸和对照组的吸光度值也有差异(P<0.01，LSD法)。吸光度值与反义寡核昔酸的作用时间和剂量间有依赖关系，即吸光度值随着反义寡核昔酸的作用时间和剂量的增加而减少。反义寡核昔酸的抑制率不同浓度间有差异(F=11.633，P<0.05)并且作用时间间也有差异(F== 90.114，P<0.01)。即抑制率和反义寡核昔酸的作用时间及剂量间有依赖关系，也就是说抑制率随着反义寡核昔酸的作用时间和剂量的增加而增大。 6林m0FL的端粒酶反义寡核昔酸作用细胞72小时后，对照组与反义寡核昔酸作用组凋亡细胞数有差异，3.567%士1.562%对13.627%士0.953%，(t二9.522，P二0.01<0.05)，在G0/Gl期前出现亚二倍体凋亡峰。对照组和反义寡核普酸作用组间端粒酶活性分别为:1 .209，0.308对0.447士0.087，差异有统计学意义(t二4.128，P<0.05)，端粒酶活性下降，抑制率为63%。结论通过本实验，可以得到如下结论:1.反义寡核昔酸作用细胞后，细胞生长受到抑制，并出现调亡。 2.抑制率和反义寡核昔酸的浓度和作用时间呈直线关系(F二n .633，P<0-05和F二oo·114，P<0.01)。抑制率随着反义寡核昔酸的浓度和作用时间的增加而增大。 3.反义寡核昔酸作用细胞后，端粒酶活性受到抑制，抑制率为63%。