胭脂花组织培养及其黄酮类成分研究

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胭脂花是报春花科(Primulaceae)报春花属(Primula)植物,全草可以入药,有止痛、祛风的功能,可用于治疗癫痫头痛,是一种重要的传统蒙药材。本文以胭脂花无菌苗的叶柄为外植体,研究了不同种类及不同浓度配比的植物生长调节剂对其不定芽、愈伤组织的诱导以及增殖、生根情况的影响,建立了胭脂花的组织培养再生体系。利用紫外分光光度法对再生植株及野生植株进行总黄酮含量测定,应用高效液相色谱法对其中的黄酮类单体的种类和含量进行了测定,并用DPPH法测定了再生植株及野生植株的抗氧化能力。本研究为胭脂花的进一步开发利用提供了理论基础。主要研究结论如下:1、以胭脂花的叶片和叶柄为外植体,植物生长调节剂对叶片的诱导率均为零。以胭脂花的叶柄作为外植体,单一生长调节剂的诱导效果均不理想。最佳的诱导条件是18±2℃暖光,适宜的诱导培养基为MS+2.0mg/L NAA+0.5mg/L KT,诱导率为62.78%。诱导产生的不定芽叶柄较高,叶片较大,长势良好。2、对再生植株进行生根培养,适宜的生根培养基为MS培养基,生根率100%,平均生根条数为6.63条,平均根长为5.72cm。生根后将再生植株进行移栽,成活率达100%。3、采用紫外分光光度法测定胭脂花中总黄酮的含量,以芦丁为标准品,测得不同生长调节剂诱导下的再生植株中,0.5mg/L2,4-D诱导的再生植株总黄酮含量最高,为8.395mg/g;1.0mg/L2,4-D+4.0mg/L TDZ诱导的再生植株总黄酮含量也较高,为8.341mg/g。野生胭脂花植株中的总黄酮含量为11.997mg/g。4、采用高效液相色谱法测定胭脂花中黄酮类单体的含量,以表儿茶素、芦丁、槲皮苷、槲皮素、淫羊藿苷、异鼠李素为对照品,测得野生植株中含有表儿茶素、芦丁、槲皮苷三种黄酮类物质,含量分别为0.0402mg/g、2.1510mg/g、0.1941mg/g。0.5mg/L2,4-D和1.0mg/L2,4-D+4.0mg/L TDZ的培养基中的再生植株中含有的三种单体成分含量均与野生植株相近,其中芦丁含量分别达到1.7465mg/g和1.7951mg/g。1.0mg/L2,4-D+4.0mg/L TDZ的培养基中的再生植株中还含有淫羊藿苷,含量为0.0427mg/g。5、野生植株及再生植株均有一定的抗氧化活性。再生植株的抗氧化活性最高的为双因素诱导的再生植株,1.0mg/L2,4-D+4.0mg/L TDZ与2.0mg/L NAA+0.5mg/L KT诱导下的再生植株的IC50分别为111.012μg/mL和113.242μg/mL。野生植株的IC50为60.033μg/mL。
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