ZLW调控SmAP干预宿主巨噬细胞极化的分子机制

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目的:研究日本血吸虫体表非特异性结合短肽ZLW调控日本血吸虫碱性磷酸酶SmAP,干预小鼠巨噬细胞极化的分子机制。方法:(1)分别用AMP+SmAP+ZLW?A2a受体激动剂及抑制剂、A2b受体激动剂及抑制剂处理生长良好的小鼠巨噬细胞RAW264.7,ELISA检测各试剂最佳浓度。(2)Western Blot检测ZLW作用后细胞内一氧化氮合酶以及精氨酸酶1蛋白含量变化,ELISA检测细胞上清液中腺苷浓度的改变,对硝基苯磷酸二钠法检测日本碱性磷酸酶酶活性,实时荧光定量PCR检测细胞上清液中一氧化氮合酶、精氨酸酶1 mRNA的表达变化,硝酸还原酶法测定一氧化氮的浓度。(3)免疫荧光鉴定M2型巨噬细胞。结果:(1)Western Blot分析结果显示,ZLW作用后细胞内一氧化氮合酶表达上调,精氨酸酶1表达下调。ELISA结果显示,腺苷合成减少,腺苷受体激活度下降。对硝基苯磷酸二钠法结果显示,ZLW作用后SmAP酶活性降低。qRT-PCR结果显示一氧化氮合酶的mRNA表达上调,精氨酸酶1的mRNA表达水平下调。硝酸还原酶法结果显示,处理组一氧化氮表达量上升。(2)免疫荧光技术结果显示M2型巨噬细胞数量减少。结论:ZLW可降低SmAP的酶活性,ZLW通过降低SmAP的酶活性,减少细胞外腺苷合成,导致腺苷受体激活率下降,从而抑制巨噬细胞M2型极化。
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